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玻璃化、褐化现象的防治技术 东南景天在组培过程中的褐化现象 防治褐化的途径 1.选择适宜的外植体 幼龄外植体 外植体越小,切面与体积的比率越大,伤害及褐化的程度越大(Bonga) 2.对外植体进行预处理 预处理包括:流水冲洗、低温消毒、预培养。 3.添加褐变抑制剂和吸附剂 褐变抑制剂:抗氧化剂、PPO 的抑制剂等。 吸附剂:可溶性聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、活性炭等。 防治褐化的途径 4.选择适宜的培养基和培养条件 合适的温度、pH 碳源 5.多次转移 在兰花、无花果、核桃的组织培养中效果尤为明显。 玻璃化 在进行植物组织培养时,经常会发现试管苗生长异常,表现为试管苗叶、嫩梢呈水晶透明或半透时,水浸状;整株矮小肿胀、失绿;叶片皱缩成纵向卷曲、脆弱易碎;叶表缺少角质层蜡质,没有功能性气孔,不具有栅栏组织,仅有海绵组织。 玻璃化发生原因 控制和克服玻璃化苗的措施 (1)降低培养基中细胞分裂素和赤霉素浓度,添加低浓度多效唑、矮壮素等生长抑制物质。 (2)控制适宜的培养温度,避免温度过高,变温培养时注意温差不宜过大。 (3)使用透气性好封口材料,改善培养容器的痛风换气条件,降低容器内湿度。 (4)适当增加培养基琼脂浓度,降低培养基的水势。 (5)减少培养基中含氮化合物的用量,选用低NH4+水平的B5培养基。 (6)增加自然光照,光照强度较弱时,可通过延长时间进行补偿。 (7)控制继代次数。 * PPT讲解:金平 PPT制作:林易容 文献资料查找:张丹桂、李卓娅 创新实验131班 一、褐化 二、玻璃化 什么是褐化? 褐变现象是由于建立外植体无菌系时,切口附近的细胞受伤害,破坏了酚类化合物和多酚氧化酶的分隔状态,使得酚类化合物和多酚氧化酶相遇,酚类化合物氧化形成醌类物质,并进一步与蛋白质聚合,从而引起组织代谢活动紊乱,导致组织生长停滞,最终衰老死亡。 影响褐化的因素: 1、外植体自身的原因 (1)植物种类及基因型 褐变程度由重到轻:粉菠萝、水塔花、红星凤梨、七彩凤梨。 (2)外植体部位、生理状态、取材时期、外植体的大小及受伤程度 幼龄树比老龄树褐化轻、褐化率低; 富士苹果和金华桃在9 月到2 月取材褐变轻,5 月到8 月取材褐变重。 2、外植体所处的培养环境 无机盐浓度 光照时间、光照强度 易褐化的培养环境 pH 温度 玻璃?透明? 东南景天在组培过程中的玻璃化现象 玻璃化苗是在芽分化启动后的生长过程,碳、氮代谢和水分发生生理性异常所引起。其实质是植物细胞分裂与体积增大的速度超过了干物质生产和积累的速度,植物只好用水分来充涨体积,从而表现玻璃化。不同作物种类或品种,玻璃化的发生频率各不相同,在情人草中较少见,香石竹中则较普遍。 *
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