第七章分子发光法1技术方案.pptVIP

第七章 分子发光分析法 第一节 概述 分子发光：某些物质的分子吸收各种能量跃迁到较高的电子激发态后，在返回基态的过程中，伴随有光辐射。 物质因吸收光能而激发发光的现象，称为光致发光， 吸收电能之后的发光现象叫做电致发光， 若吸收化学反应能激发发光，称为化学发光， 而发生在生物体内有酶类物质参与的化学发光反应则称为生物发光。 分子荧光和分子磷光属于光致发光，是由两种不同发光机理过程中产生的。 普通荧光在光照停止后几乎立即停止，而磷光寿命较长，往往能延续一段易测出来的时间后停止。 第二节 分子荧光分析法 一、分子荧光和磷光的产生 1、电子自旋状态的多重性（multiplicity） 一个所有电子自旋都配对的分子的电子态称为单重态（singlet state），用“S”表示；激发态分子中电子自旋平行的电子态称为三重态（triplet state），用“T”表示。 电子自旋状态的多重性M=2S+1，其中S是电子的总自旋量子数，它是分子中所有价电子自旋量子数的矢量和。 如果两个价电子的自旋方向相反，S=(-1/2)+1/2=0，多重态M=1，该分子便处于单重态。 当两个电子的自旋方向相同时，M=3，分子处于三重态。 基态为单重态的分子用S0表示。S0态的一个电子受激跃迁到与它最近的较高分子轨道上且不改变自旋，即成为单重第一激发态S1，当受到能量更高的光激发且不改变自旋，就会形成单重第二电子激发态S2。 如果电子在跃迁过程中改变了自旋方向，使分子具有两个自旋平行的电子，则该分子便处于第一激发三重态T1或第二激发三重态T2。 各状态能量高低为： S2T2S1 T1S0, T1是亚稳态,平均寿命在10-4～10秒；且T1→S0形式的跃迁有可能导致磷光光谱的产生。 2、无辐射跃迁 （1） 振动驰豫 产生振动驰豫的时间极为短暂，约为10-12秒。 （2） 内转换 内转换发生的时间在10-11～10-13秒。 （3）系间窜跃 不同多重态之间的无辐射跃迁叫系间窜跃。需要10-6秒的时间。易于在S1和T1间进行，发生系间窜跃的根本原因在于各电子能级中振动能级非常靠近，势能面发生重叠交叉，而交叉地方的位能是一样的。当分子处于这一位置时，既可发生内部转换，也可发生系间窜跃，这决定于分子的本性和所处的外部环境条件。 3、分子荧光和磷光的产生及其类型 （1）分子荧光 处于S1或T1态的分子返回S0态时伴随发光现象的过程称为辐射去激，分子从S1态的最低振动能级跃迁至S0态各振动能级时所产生的辐射光称为荧光，其几率大，辐射过程快，一般在10-8秒左右完成，因而称为快速荧光或瞬时荧光，简称荧光。 斯托克斯位移 分子发射荧光的波长总比激发光长，能量比激发光小，这种现象称为斯托克斯位移，用符号“S”表示，它是荧光物质最大激发光波长与最大发射荧光波长之差，但习惯上用波长的倒数即波数之差表示如下： 式中，λex、λem分别为最大激发光和最大发射荧光波长（nm）。 其物理意义:荧光未发射之前，在荧光寿命期间能量的损失。斯托克斯位移越大，激发光对荧光测定的干扰越小，当它们相差大于20nm以上时，激发光的干扰很小，可进行荧光测定。 （2）分子磷光 当受激分子降至S1的最低振动能级后，如果经系间窜跃至T1态，并经T1态的最低振动能级回到S0态的各振动能级，此过程辐射的光称为磷光。 磷光的波长比荧光更长些，其寿命通常在10-4～10秒间。图3.1为分子荧光和磷光产生示意图。 常见的猝灭的类型 1）自猝灭 如果M*在发光之前和它的基态碰撞引起猝灭，或生成不发光荧光的基态多聚体，或因自吸收导致荧光强度减弱，这些现象统称为荧光分子的自猝灭。 2）电荷转移猝灭 激发态分子往往比基态具有更强的与其他物质发生氧化还原的能力，从而导致荧光猝灭，这种现象称为电荷转移猝灭。 3）转入三重态猝灭 经系间窜跃转入三重态的大多数分子，很容易把多余的能量消耗在碰撞之中使荧光猝灭，这种现象称为三重态猝灭。 4）光化学反应猝灭 某些光敏物质在紫外或可见光照射下很容易发生光化学反应或发生预解离跃迁。 3、荧光猝灭法 对于静态猝灭，荧光分子M和猝灭剂Q如果生成非荧光基态配合物MQ，则由于荧光的总浓度cM=[M]+[MQ]，根据荧光强度与荧光分子M浓度的线性关系进行计算。 一、低温荧光分析 低温荧光分析是将试样溶于有机溶剂中，在液氮（温度77K）条件下形成刚性玻璃状物后，测量荧光，这样可减少分子间的碰撞，防止荧光猝灭。 所用溶剂应具备以下条件 易于制备和提纯 能很好地溶解被分析物质