chapter+08-10+enzyme-02.ppt

* * * * * * * * * * * * * * * 3.3 可逆抑制作用 抑制剂与酶蛋白以非共价方式结合，引起酶活性暂时性丧失。抑制剂可以通过透析等方法被除去，并且能部分或全部恢复酶的活性。 类型： A.竞争性抑制 B.非竞争性抑制 C.反竞争性抑制 概念：抑制剂结构与底物相似，抑制剂可以与底物竞争酶的活性部位，阻止底物与酶的结合，减少了酶与底物的作用机会，降低酶的活力。 解除方法：通常可以通过增大底物浓度，即提高底物的竞争能力来消除。 3.3.1 竞争性抑制 3.3.1 竞争性抑制 实例：磺胺药物的药用机理 H2N- -SO2NH2 对氨基苯磺酰胺 H2N- -COOH 对氨基苯甲酸 对氨基苯甲酸 谷氨酸 蝶呤 叶酸 3.3.1 竞争性抑制 3.3.1 竞争性抑制 反应模式： 动力学方程： 双倒数作图和V-[S]曲线 3.3.1 竞争性抑制 竞争性抑制的特点： 抑制程度取决于抑制剂与酶的相对亲和力及底物浓度。 I与S结构类似，竞争酶的活性中心。 动力学特点：Vmax不变，表观Km增大 3.3.1 竞争性抑制 概念：有些抑制剂可与底物同时结合到同一酶的不同部位，形成不能分解的抑制剂、底物和酶的复合物（EIS），导致催化活性降低。 3.3.2 非竞争性抑制 反应模式： 动力学方程： 双倒数作图和V-[S]曲线 3.3.2 非竞争性抑制 非竞争抑制的特点： 抑制剂与酶活性中心外的必需基团结合，底物与抑制剂之间无竞争关系。 抑制程度取决于抑制剂的浓度。 动力学特点：Vmax降低，表观Km不变。 3.3.2 非竞争性抑制 概念：抑制剂只有当酶与底物结合后才能与ES复合物结合形成ESI，形成的ESI三元复合物不能进一步分解为产物，对酶的催化作用产生。 3.3.3 反竞争性抑制 反应模式： Uncompetitive inhibition 动力学方程： 双倒数作图和V-[S]曲线 3.3.3 反竞争性抑制 反竞争抑制的特点： 抑制剂只与酶－底物复合物结合。 抑制程度取决于抑制剂的浓度及底物的浓度 动力学特点：Vmax降低，表观Km降低。 3.3.3 反竞争性抑制 3.4 各种可逆抑制类型小结 4.1 pH对酶作用的影响 各种酶pH值的活性曲线 2 4 6 8 10 0 胃蛋白酶 胰蛋白酶 最适pH :酶表现出最大活性的pH 生物体内大多数酶的最适pH接近于中性 木瓜蛋白酶 4.2 温度对酶作用的影响 最适温度:酶表现最大催化能力时的温度 温度升高,酶促反应速度加快。 温度升高,酶的高级结构将发生变化或变性，导致酶活性降低甚至丧失。 反应的速度 温度tOC 最适温度 4.3 激活剂对酶作用的影响 无机离子 ：K+、Na+、Mg2+、Cu2+、Mn2+、Zn2+和Cl-、Br-等。 小分子有机物：抗坏血酸、半胱氨酸、谷胱甘肽、 EDTA等。 生物大分子 ：蛋白激酶 、蛋白酶等 凡是能提高酶活性的物质，称为酶的激活剂 2.2.3 米氏方程中各参数的意义 If [S]Km, If [S]Km, ①物理意义：酶催化反应速率达到最大反应速率一半时的底物浓度。 ②通过测定酶的Km值，可以鉴别酶的种类 ③可用于判断反应级数。当[S] 0.01Km时，反应为一级反应；当[S]100Km时，反应为零级反应；当0.01Km[S]100Km时，为混合级反应。 ④当k－1k2时，Km可以近似的表示酶与底物的亲和力。 ⑤可用来判断酶的最适底物。 ⑥根据Km值可以判断代谢路径的限速步骤。 米氏常数的意义 反应速度 酶的浓度 [E] v 当[S]＞＞[E]，反应速度与酶浓度成正比 关系式为： V = k[E] 2.2.4 酶浓度对酶作用的影响 Turnover number 酶的转换数 转换数，代表单位时间内每个酶分子将底物转换成产物的微摩尔数(μmol)。它相当于一旦酶－底物复合物ES形成以后，酶将底物转换成产物的能力或效率。 可以用于检验是否达到恒态或者平衡态。 linewenver-Burk的双倒数作图法 2.2.5 米氏常数的测定 Hanes作图法 双倒数形式两边均乘以[S] 以[S]/V和[S]分别为纵轴和横轴作图 2.2.5 米氏常数的测定 斜率= 1/Vm Km/Vm -Km [S]/V [S] Hanes作图法 2.2.5 米氏常数的测定 Eadie-Hofstee作图法 双倒数形式两边均乘以V×Vmax 以V和V/[S]分别为纵轴和横轴作图 2.2.5 米氏常数的测定 Vm/Km Vm V V/[s] 斜