实验八水质的微生物检验解答.ppt

实验八 水质的微生物检验 实验目的 了解水质微生物检验的原理 学习测定水中大肠菌群数量的多管发酵法 水质微生物检验 水中细菌总数的测定——平板菌落计数法 水中大肠菌群数量的测定 水中大肠菌群数量的测定 大肠菌群——能在35 ℃、 48h内发酵乳糖产酸、需氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。 主要包括埃希氏菌属、柠檬酸杆菌属、肠杆菌属、克雷伯氏菌属的细菌。 粪便中存在大量的大肠菌群细菌，在水体中存活的时间和对氯的抵抗力与倡导致病菌，如沙门氏菌、志贺氏菌相似。 实验方法和步骤 1．水样的采取 自来水：先将自来水龙头用火焰烧灼3min灭菌，再开放水龙头使水流5 min后，以灭菌三角烧瓶接取水样，以待分析。 池水、河水或湖水：应取距水面10- 15 cm的深层水样，先将灭菌的带塞玻璃瓶，瓶口向下浸人水中，然后翻转过来，除去玻璃塞，水即流人瓶中，盛满后，将瓶塞盖好，再从水中取出，最好立即检查，否则需放人冰箱中保存。 多管发酵法检测水样中大肠菌群 自来水检查 初发酵试验接种水样总量为300ml ：在2个含有50 ml三倍浓缩的乳糖蛋白脉发酵烧瓶中，各加入100 ml水样。在10支含有5 ml三倍浓缩乳糖蛋白陈发酵管中，各加入10 ml水样。混匀后，37℃培养24h，24 h未产气的继续培养至48 h。通过平板分离、涂片、染色、镜检和复发酵试验检查各发酵管（瓶）中是否有大肠菌群存在。 证实有大肠菌群存在后，再根据初发酵试验的阳性管（瓶）数查阅接种水样总量为300ml检索表，即得大肠菌群数。 池水、河水或湖水等的检查 (1）将水样稀释成10-1与10-2． (2)分别吸取lml 10-1与10-2的稀释水样和l ml原水样，各注入装有10 ml普通浓度乳糖蛋白胨发酵管中。另取10 ml和100 ml原水样，分别注人装有5 ml和50 ml三倍浓缩乳糖蛋白胨发酵液的试管（瓶）中。 （3）初发酵实验、平板分离和复发酵实验 （4）发酵结果查阅接种水样总量为111.11ml检索表。 实验内容及安排 实验内容 检查自来水中大肠菌群数目 实验安排： 水样采取：已完成 初发酵试验（第10周完成） 平板分离： （第10周完成） 涂片，革兰氏染色，镜检 （第11周完成） 复发酵试验： （第11周完成） 本周任务 第1天： 每组准备如下实验材料 配制乳糖蛋白胨液体培养基（内置小倒管）200ml，分装于2个三角瓶中（每瓶50ml）和15支试管（每支5ml ），115度灭菌30min。 每组准备伊红美蓝琼脂平板10个 无菌移液管2支（10ml） 无菌量筒2个 初发酵试验：在2个含有50 ml乳糖蛋白胨发酵烧瓶中，各加入100 ml水样。在10支含有乳糖蛋白陈发酵管中，各加人10 ml水样。混匀后，37℃培养24h，24 h未产气的继续培养至48 h。 48h后： 平板分离：经24 h培养后，将产酸产气及48 h产酸产气的发酵管（瓶），分别划线接种于伊红美蓝琼脂平板上，再于37℃下培养18-24 h。 下周任务 将符合下列特征的菌落的一小部分，进行涂片，革兰氏染色，镜检。 ①深紫黑色、有金属光泽。 ②紫黑色、不带或略带金属光泽。 ③淡紫红色、中心颜色较深。 复发酵试验：经涂片、染色、镜检，如为革兰氏阴性无芽抱杆菌，则挑取该菌落的另一部分，重新接种于普通浓度的乳糖蛋白陈发酵管中，每管可接种来自同一初发酵管的同类型菌落1-3个，37℃培养24 h，结果若产酸又产气，即证实有大肠菌群存在。 实验报告 以文字形式说明多管发酵法检测水样中大肠菌群的原理和操作过程。 记录并报告实验结果。 * 典型菌落 产气 报告为大肠菌群阳性 不产气 报告为大肠菌群阴性 乳糖蛋白胨培养基 乳糖蛋白胨培养基各5ml *