法舒地尔、TRPM8和microRNA-12a在骨髓间充质干细胞分化为神经细胞中的作用.pdf

摘要 的和成熟的神经细胞中表达，而在神经前体细胞中表达很少。本研究通过构建携 fluorescence 带含有绿色荧光蛋白(green protein，GFP)报告基因的大鼠 干细胞向神经细胞分化的影响。 第一部分法舒地尔诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经 细胞分化 目的 探讨Rho／Rho激酶(ROCK)抑制剂法舒地尔在体外诱导大鼠骨髓间充质干细 胞(MSCs)向神经细胞分化中的可行性。 方法 全骨髓培养法分离培养大鼠MSCs；采用法舒地尔诱导MSCs：倒置显微镜 观察诱导后各组的细胞形态学变化；AO．EB染色法鉴定诱导后各组细胞存活率； 免疫荧光法鉴定诱导后NSE、NF200、GFAP的表达，判断其分化情况。 垂士里 二日刃譬 AO．EB染色法鉴定诱导后细胞存活率 诱导后存活细胞胞质呈绿色，核为亮绿色，核形态规则，为圆形或椭圆形， 死亡细胞胞质呈红色，核呈亮红色，核皱缩或碎裂。随着诱导时间延长，死亡细 胞数量增加。通过AO．EB染色法鉴定法舒地尔诱导30 及90．1-4-1．3％。 诱导后免疫荧光鉴定 法舒地尔诱导组，随着诱导时间延长，NSE、NF200表达显著增加，GFAP rain，通过免疫荧光鉴定，NSE阳性率(分 表达较少。诱导后60、90、120及180 GFAP表达率均小于5％。 第二部分Tl冲M8在体外骨髓间充质千细胞分化为神 经细胞中的表达变化 瞬时受体电位(transient receptorpotential，TRP)是一类广泛存在于细胞膜 上的跨膜离子通道，可以辨别味觉、温度觉等特殊感觉。TI冲通道亚型TRPM8 主要存在于特定神经细胞的细胞膜上，当温度低于27℃或者薄荷醇存在的条件 II 摘要 下，TRPM8通道开放，使Ca2+等带正电的粒子进入细胞，具有重要的生理意义。 目的 本研究探讨TRPM8在大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)分化为神经细胞中 的表达变化和基本作用。 方法 在建立体外法舒地尔诱导大鼠MSCs分化为神经细胞的基础上，采用免疫细 胞化学法、Western Blot法检测TRPM8的表达变化。 结果： TRPM8表达最高(89．560／壮12．24％)；诱导120min，TRPM8表达逐渐下降 (59．25％．q：9．15％)，Western Blot也有类似的趋势。 鼠骨髓间充质干细胞的研究 目的 经细胞分化中的作用。 方法 fluorescence 本研究构建携带含有绿色荧光蛋白(green protein，GFP)报告基因 的大鼠microRNA．124a慢病毒载体，将其感染至大鼠骨髓间充质干细胞 stem cells，MSCs)，并传代，采用法舒地尔诱导大鼠MSCs分化为 (mesenchymal 神经细胞。并于倒置荧光显微镜下观察MSCs感染后的荧光表达情况；采用免疫 及胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达变化，M订方法检测细胞存活率。 结果 免疫细胞化学染色法 显著高于其它两组(P0．05)。各组GFAP的表达率都小于5％，无显著性差异。 Western Blot结果 三组分别诱导分化1h后均表达NSE、NF200，未感染组和阴性对照组无明 显的统计学差异，而感染组表达的NSE、NF200较其它两组明显增高，有显著 差异。 III 摘要 结论 1本研究发现R