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摘 要
植物寄生线虫是一类世界性分布的重要植物病原物,其寄生范围广,环境适应性强,
几乎每种作物都受到植物线虫的侵害。真菌杀线剂是一类环境友好型生防因子,越来越受
1)是一株已被证实具有较好杀线
到广泛重视。海洋来源的枝顶孢霉(Acremnium,BH053
虫作用的海洋真菌。其代谢产物具有分子量小、水溶性好、热稳定性强、杀线虫活性高等
特点。本文在原有培养条件的基础上对不同氮源对BH0531生长情况的影响进行了比较探
究,并对代谢产物中杀线虫有效组分进行初步分离和分析测定,主要研究成果如下:
1.不同氮源对BH0531生长的影响
改变察氏培养基的氮源种类,探究分别添加1g/L、2g几、3g/L、4g/L的NaN03、KN03、
sp.BH0531)菌体生长量以及代谢产物对松材线虫、黄瓜根结线虫二龄幼虫存活的影响。测
定结果显示:
(1)不同氮源对BH0531菌丝体的表观有明显的影响。有机氮源中,菌丝体外观结构相
对紧密,呈均匀球状分布,直径明显大于无机氮源条件;无机氮源中,发酵液透明,呈淡
黄色,菌丝体结构松散,多不成球,絮状或外观不规整。
(2)不同氮源对菌体的生长明显的影响(Q=0.05),其对菌体生长的作用效果依次为:
量不仅受氮源种类的影响,还受到氮源含量的影响。有机氮源中表现出与含量成正相关的
趋势,而无机氮源含量与菌体的生长量随浓度变化显现出抛物线关系。此外,发酵液的pH
也与氮源的类型相关,BH0531经有机氮源发酵液后,代谢产物的pH值为5.8左右,而经
无机氮源发酵液后pH在3.9~6.5之间。
(3)杀线虫活性测定结果显示,发酵液有无杀线虫活性与菌体生长量无相关性,但与pH
有一定的关联,接近中性的发酵液杀线虫活性相对较高。其中,对松材线虫的测试表明,
以硝态氮的NaN03、KN03为氮源的发酵液具有较高的杀线虫活性。1g/L、2g/L、4eeL
的NaN03发酵液对松材线虫第3d的校正死亡率分别为96.05%、95.66%、93.37%,对根
0/0--92.72%之间。
结线虫第3d的校正死亡率在61.96
2.发酵液小分子活性物质的分离及杀线虫活性测定
BH053
ITl
呈棕黄色为晶体状颗粒,表明BH053l菌株所产杀线虫活性物质具有结晶的性能,干燥物
得率为12.8079·L~。
1
发酵液小分子组分经过D35阴离子交换树脂除酸后,其对松材线虫5d的校正死亡率
可达84.75%。经过Dll5阳离子交换树脂除碱后的分离液,对松材线虫与根结线虫5d的
死亡率分别达到76.5%和80.01%。
乙醇洗脱液所得的5组液体中,对松材线虫和黄瓜根结线虫的最高杀线率仅为51.35%和
49.32%。离子交换的结果排除了酸根本身或阳离子本身的作用;AB.8大孔吸附树脂分离
的结果排除了非极性物质的惟一性,据此推测活性代谢物可能具有两性物质的特性。
用Sephadex
G.25的分辨率介于1000.5000之间,可以判断活性组分
92.86%、91.21%。鉴于Sephadex
dalton。
的分子量小于5000
3.发酵液小分子活性物质性质的分析
G.25分离所得的各组分经紫外.可见全波长扫描发现在200-400nm间有吸收峰,存在
进一步的纸色谱定性分析结果显示,活性物中邻羟基、多羟基醇、糖醛酸等基团显色
反应为阳性,提示有相关基团存在。
对红外光谱检测图谱显示,3400.52cm。1处是羟基或羧酸羟基的特征吸收峰,
1092.74cm’1处为C.O键,1
缩振动或伯胺的吸收峰,查询结果显示,席弗碱类物质在该处有吸收峰,提示活性物可能
具有类似基团或结构。高效液相色谱测定结果表明,与标样氨基酸相比,未检测到氨基酸
存在,因而考虑排除其为蛋白质物质的可能性。其具体的化学组成成分和结构还有待进一
步的深入研究。
关键字:海洋丝状真菌BH053l;不同氮源;杀线虫代谢产物;松材线虫;根结线虫
IV
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