赭曲霉素A对GES1细胞Rad51表达的影响和可能机制的研究.pdfVIP

中文摘要 赭曲霉毒素A对GES。1细胞Rad51表达的影响 及可能机制的研究 摘 要 曲霉)和青霉菌属产生的一种真菌毒素。在世界范围内广泛存在OTA污 染，谷物、蔬菜、咖啡、饮料、动物饲料中均有检测到OTA的报道。其 毒性作用包括肾毒性、肝毒性、致畸性、免疫毒性、遗传毒性和致癌性等。 1993年国际癌症研究中心IARC将OTA归类为“可能的人类致癌物’’。 本实验室前期研究已经发现，OTA可以诱导正常人胃黏膜上皮细胞DNA 双链断裂损伤和G2期阻滞，这可能与胃癌的发生发展密切相关。 doublestrand 双链断裂损伤(DNA Rad51B、 组(职)的核心蛋白，其分子量为37kDa。Rad51家族成员包括g Rad51C、Rad5 1作 为一种转移酶通过聚集在DNA断裂末端上形成核蛋白丝，而核蛋白丝可 以促进被损伤的DNA链和未受损伤的同源姊妹染色单体进行链交换。其 表达异常会直接影响HR的功能，进而影响DSBs的修复，导致基因组的 不稳定和肿瘤的发生。 近年来研究发现，紫外照射、电离辐射和丝裂霉素等因素可以刺激多 种细胞(包括人乳腺癌细胞、人鼻咽癌细胞和人结肠黏膜上皮细胞等) 关系依然存在争议。在黄曲霉毒素B1作用下啤酒酵母菌Rad51被激活， 不对等的姊妹染色单体交换增加，引起基因突变；与此同时，还有研究发 现一些化疗药物、缺氧等因素可以使Rad51表达降低，加重细胞毒性作 1的影响国内外均未见报道。本 用。而目前有关OTA对人正常细胞Rad5 1在OTA诱导GES一1细胞 实验首先探讨MR修复途径中的关键分子Rad5 调控机制。这将为评价OTA在胃癌发生、发展中的可能作用提供科学依 据。 中文摘要 方法： 1细胞培养与处理 U／ml链霉素、100 的培养箱中培养，细胞贴壁生长。选择对数生长期的细胞(传代后24h) 随机的分为溶剂对照组和实验组。溶剂对照组给予终浓度为0．08％的甲醇 (以前的研究显示，当甲醇终浓度为0．08％时，通过MTT和流式细胞术 检测分析其对细胞增殖和细胞周期分布均无影响)。实验组分别给予经甲 集细胞进行相关指标检测。 2p38和ERK阻断剂处理 10山或 取对数生长期GES．1细胞分别给予p38的阻断剂SB203580 ERK的阻断剂PD98059 OTA培养24h， 10州预处理O．5h，其后加入20rtM 再收集细胞检测Rad51的表达。 3 1质粒转染 p53siRNA转染和Rad5 用100pmol 继续培养24h，然后收集细胞进行相关指标检测。其阴性对照为Ne昏ive control siRNA(NC 1的质粒和作为阴性对照的空 siRNA)。2陷表达Rad5 养24h，再收集细胞进行相关指标检测。 4蛋白免疫印迹(Westernblot) 各种因素处理GES．1细胞后，提取细胞总蛋白，用蛋白免疫印迹方 法，检测OTA处理后人胃黏膜上皮细胞GES．1中各种指标的表达情况。 real-timePCR) 5实时定量PCR(Quantitative 利用实时定量PCR检测不同处理方式对人胃黏膜上皮细胞GES．1中 Rad51mRNA表达的影响。每组样品以目的基因与内参照基因人类管家基 计学分析。 6