常见水生动物和其环境DNA的定性和定量关系.pdfVIP

摘要 ㈣㈣㈣㈣删l 摘要 5 Y285721 淡水生态系统的生物多样性正面临严重威胁，掌握淡水生态系统生物多样性 的变化动态是制定科学的多样性保护对策的前提。传统的以物种为对象的淡水生 物多样性的研究方法因耗资巨大、费力费时、物种鉴定人才稀缺等原因，难以满 足日益增长的多样性保护需要。本研究以环境DNA为切入点，探索淡水生态系 统生物多样性研究的新理论与新方法。主要研究内容包括：1)常见水生动物资 料收集整理、DNAbarcoding序列筛选、特异引物设计与实验验证以及环境DNA 的高效提取与检测；2)室内饲养条件下萼花臂尾轮虫、鲤鱼、泥鳅和日本沼虾 等4种常见水生动物的环境DNA定性检测；3)室内饲养条件下泥鳅和日本沼 虾饲养密度与环境DNA丰度的定量分析。取得的主要研究成果如下： 系统搜集整理了常见水生动物种类的文献资料，搜集汇总了常见水生动物 通过了特异性的实验验证。比较了真空浓缩仪浓缩、PEG20∞浓缩、旋转蒸发 仪浓缩、冷冻干燥机浓缩、酒精多次沉淀法浓缩5种水样浓缩方法，发现酒精多 次沉淀法浓缩的水样可获得最佳的环境DNA的提取效果。 开展了萼花臂尾轮虫(曰Mc矗fD础cd，弦疗勋，．螂尸口胁)、鲤鱼(o矿砌淞c卯国)、 4种常见水生动物的室内饲养试验并对它们的环境DNA进行了定性检测：利用 醇沉法提取从饲养箱中抽取的水样里的环境DNA，以4种常见水生动物的环境 DNA模板、利用4种常见水生动物的特异性引物进行普通PCR扩增和PCR产 物琼脂糖凝胶电泳检测，结果显示，4种常见水生动物的环境DNA均能够扩增 出特异目的片段。这表明，通过对环境DNA的检测确实可以实现对水体中生活 的水生动物的定性检测。 进行了泥鳅和日本沼虾2种常见水生动物的饲养密度与环境DNA丰度的定 量分析：利用荧光定量PcR的方法对不同饲养密度的水样中的环境DNA进行环 境DNA的定量分析。结果，无论是泥鳅还是日本沼虾，它们环境DNA的量均 随饲养密度的增加而增加，两个物种的饲养密度与其环境DNA之间的模拟曲线 均为二项式曲线，显示动物密度与其环境DNA之间存在非线性的相关关系。 综上可见，环境DNA与相应水生动物之间确实存在着密切的内在联系，通 过对水体中环境DNA的定性、定量检测可以实现对水体中生活的水生动物种类 与丰富度的检测。 关键词：环境DNA，泥鳅，日本沼虾，鲤鱼，萼花臂尾轮虫，c0I，qPcR I Ab曲ract Abstract The offreshwater 0n undervarious biodiVersity ecosyStems thrcatS， Eanh，being need is a usto a comprehensiVeprotection．It necessarySt印for get thorou曲 underStandsaboutthe statusofaf-reshwater beforewecan biodiVerSityquo ecosystem workoutanemcient countermeasureforit．TraditionaI biodiVersi够protection too labori叫s锄d 叩ecies—centeredbiodiVers时suⅣeyingmethod，beingcostly