消积饮联合CIK通过AMPKαSp1EZH2DNMT1相关通路抗肺癌生长作用机制.pdf

表达DNMTl及EZH2后，通过Westernblot法观察过表达相应蛋白后对消积饮活化AMPK Q的影响，确定DNMTl和EZll2及p-AMPKQ的关系。 1．2 体内实验 1．2．1消积饮对裸鼠移植瘤的体积及瘤重的影响：通过对裸鼠皮下接种荧光素酶 标记的A549肿瘤细胞建立肿瘤模型后，给予不同剂量消积饮灌胃处理，在处理终点 时观察消积饮对裸鼠移植瘤的体积及瘤重的影响。 1．2．2消积饮对裸鼠移植瘤生物发光强度的影响：通过小动物活体成像系统，观 察给予消积饮低剂量、中剂量、高剂量处理后移植瘤体中荧光素酶标记的A549细胞 增殖情况。 1．2．3消积饮对裸鼠移植瘤组织p-AMPKQ和DNMTl蛋白表达影响：提取肿瘤组 织蛋白后，采用Western blot法观察不同剂量消积饮处理后裸鼠移植瘤组织p-AYPK Q和DNMTl蛋白表达的变化。 2 消积饮联合CIK细胞抑制非小细胞肺癌细胞生长的分子作用机制 2．1 体外实验 2．1．1消积饮联合CIK细胞对非小细胞肺癌细胞生长的影响：分别采用消积饮、 处理后对A549、Pc9细胞生长的影响。 胞，采用Western 和DNMTl蛋白表达变化。 2．2 体内实验 2．2．1消积饮联合CIK细胞对裸鼠移植瘤的体积及瘤重的影响：通过对裸鼠皮下 接种肿瘤细胞建立肿瘤模型后，给予消积饮、CIK细胞及消积饮联合CIK细胞处理， 在处理终点时观察消积饮联合CIK细胞对裸鼠移植瘤的体积及瘤重的影响。 2．2．2消积饮联合CIK细胞对裸鼠移植瘤生物发光强度的影响：通过小动物活体 成像系统，观察分别给予消积饮、CIK细胞及消积饮联合CIK细胞处理后裸鼠移植瘤 体中荧光素酶标记的A549细胞增殖情况。 2．2．3消积饮联合CIK细胞对裸鼠移植瘤组织p—AMPKQ和DNMTl蛋白表达影响： 提取肿瘤组织蛋白后，采用Westernblot法观察分别给予消积饮、CIK细胞及消积饮 联合CIK细胞处理后裸鼠移植瘤组织p—AMPKC1和DIⅦITl蛋白表达的变化。 结果： 1 消积饮抑制非小细胞肺癌细胞生长的分子作用机制 1．1 体外实验 1．1．1消积饮对肺腺癌A549、Pc9细胞的生长及凋亡的影响：消积饮可以抑制 非小细胞肺癌A549、Pc9细胞的生长，呈时间剂量依赖关系；消积饮促进A549细胞 的凋亡作用呈剂量依赖关系。 1．1．2消积饮对非小细胞肺癌细胞AMPKⅡ磷酸化的影响：消积饮可以增加AMPK Q的磷酸化，呈时间依赖关系。 1．1．3消积饮对非小细胞肺癌细胞DNMTl、EZH2蛋白表达的影响及AMPKQ抑制剂 白的表达，呈剂量依赖关系，AMPKQ抑制剂可以阻断消积饮下调DNMTl、EZH2的表达。 1．1．4消积饮对Spl蛋白表达的影响及AMPKⅡ抑制剂对Spl蛋白表达的影响： 消积饮降低转录因子Spl蛋白的表达水平呈剂量依赖关系，抑制AMPKCl的活性可以阻 断消积饮下调转录因子Spl蛋白的表达。 影响；过表达DNMTl对消积饮Spl及EZH2的作用均无影响。 1．1-6 DNMTl在消积饮抑制非小细胞肺癌细胞生长中的影响：过表达DNMTl可以 逆转消积饮对非小细胞肺癌A549、Pc9细胞的生长抑制作用。 1．1．7 积饮诱导非小细胞肺癌A549、Pc9细胞磷酸化AMPKQ的作用。 1．2 体内实验 1．2．1消积饮对裸鼠移植瘤的体积及瘤重的影响：消积饮可以抑制裸鼠A549移 植瘤体积及瘤重的增长，呈剂量依赖关系。 加裸鼠肿瘤组织中p-AMPKⅡ的表达，抑制DNMTl的表达。 2 消积饮联合CIK细胞抑制非小细胞肺癌细胞生长的分子作用机制 2．1 体外实验 2．1．1消积饮联合CIK细胞对非小细胞肺癌细胞生长的影响：消积饮联合CIK细 胞抑制非小细胞肺癌A549、Pc9细胞生长具有协同作用。 的蛋白表达水平，消积饮联合CIK细胞抑制非小细胞肺癌细胞DNMTl蛋白表达具有协 同作用，但是对EZH2和Spl蛋白无明显协同作用。 2．2 体内实验 2．2．1消积饮联合CIK细胞对裸鼠移植瘤的体积及瘤重的影响：消积饮及CIK细 胞可以抑制裸鼠A549移植瘤体积及瘤重的增长，其中联合处理组对瘤重的增长抑制 llI 作用优于单一处理组。