大肠杆菌及其检验剖析.ppt

大肠杆菌及其检验 一、大肠杆菌的生物学特性 1、简介 大肠埃希氏菌习惯称为大肠杆菌，分类于肠杆菌科，归属于埃希氏菌属，大肠杆菌为人和动物肠道中的常居菌，一般多不致病，在一定条件下可引起肠道外感染。 2、形态与染色 大小0.4～0.7×1～3um,无芽胞,大多数菌株有动力。 有普通菌毛与性菌毛，有些菌株有多糖类包膜，革兰氏阴性杆菌 3、培养特性 由于此菌合成代谢能力强，在含无机盐、胺盐、葡萄糖的普通培养基上生长良好。 最适生长温度为37℃，在42-44℃条件下仍能生长，生长温度范围为15-46℃。 （1）光滑型 （2）粗糙型 4、生化反应 大部分菌株发酵乳糖产酸产气，并发酵葡萄糖、麦芽胞、甘露醇、木胶糖、阿拉伯胶等产酸产气。 5、抗原构造 比较复杂，主要由菌体O抗原、鞭毛H抗原、夹膜K抗原组成。 6、抵抗力 该菌对热的抵抗力较其他肠道杆菌强，55℃经60分钟或60℃加热15分钟仍有部分细菌存活。 在自然界的水中可存活数周至数月，在温度较低的粪便中存活更久。 二、致泻性大肠杆菌简介 某些血清型菌株的致病性强，引起腹泻，与人类疾病有关的大肠杆菌，统称为致泻性大肠杆菌（enterovirulent　E. coli ）。 一般包括四种： 肠毒素性大肠杆菌（ETEC）：引起婴幼儿和旅游者腹泻，出现轻度水泻，也可呈严重的霍乱样症状。 致病性大肠杆菌（EPEC）：是婴儿腹泻的主要病原菌，有高度传染性，严重者可致死；成人少见。 出血性大肠杆菌（EHEC）：O157：H7 侵袭性大肠杆菌（EIEC）：引起散发性或暴发性出血性结肠炎 三、大肠杆菌的检验方法 1、样品制备 以无菌操作取25 g样品,放入装有225 mL稀释剂的灭菌均质杯内,于8000 r/min均质1～2min,制成1:10样品匀液(也可用灭菌乳钵研磨的方法代替)。从制备样品匀液至稀释完毕,全过程不得超过15min。 2、LST和EC初步筛选 对每个样品,选择适宜的三个连续稀释度的样品稀释液。每个稀释度接种三管月桂基硫酸盐胰蛋白(月示)(LST)肉汤,每管接种1mL。将接种管置于36±1℃培养48±2h。 观察试管的产气情况：检查倒管内是否有气泡产生,用直径为3mm的接种环将所有48±2h内产气的LST肉汤管培养物移种于EC肉汤管中。将所有接种的EC肉汤管在30min内放入带盖44.5±0.5℃水浴箱内,培养48±2h。 3、EMB平板 取其产气管的培养物划线接种于伊红美蓝(EMB)平板,36±1℃培养24±2h。 检查平板上有无具黑色中心有光泽或无光泽的典型菌落。 如有典型菌落,则从每个平板上至少挑取2个典型菌落；如无典型菌落,则从每个平板上至少挑取2个可疑菌落。用接种针接触菌落中心部位,移种到营养琼脂斜面上,36±1℃培养18～24h。 4、生化试验 1） 靛基质试验 2） MR-VP试验 3） 柠檬酸利用试验 5、结果报告 大肠杆菌为革兰氏阴性无芽孢杆菌,发酵乳糖产酸产气,生化试验为＋＋－－或－＋－－ ，再根据LST肉汤阳性管数查MPN表,报告每克(毫升)样品中大肠杆菌MPN值。 四、致泻性大肠杆菌的检验 1、增菌 以无菌手续称取检验25g，加在225mL营养肉汤中，以均质器打碎1min或用乳钵加灭菌砂磨碎。挑取1环，接种于1管30mL肠道菌增菌肉汤内，于42℃培养18h。 2、分离 3、生化试验 1）三糖铁琼脂(TSI) 2）靛基质 3）半固体 4）pH7.2尿素琼脂 5） KCN肉汤 TSI低层+，H2S- KCN -，尿素 - 4、生化试验 5、结果报告 综合以上生化试验、血清学试验作出报告。  五、大肠杆菌 O157:H7的检验