第八章吸光光度法研究.pptVIP

第 八 章 吸 光 光 度 法 吸光光度法是基于物质分子对光的选择性吸收而建立的一种分析方法。 可见分光光度法——Visible Spectrophotometry 8.1 物质对光的选择性吸收 物质之所以呈现五彩缤纷的不同颜色，就是因为选择性地吸收了某些特定波长的可见光所致。例如：高锰酸钾为紫色；重铬酸钾为橙色。 有色溶液颜色的深浅，与有色物质的浓度成正比。 光是电磁波中的一个很小波段。 物质颜色与吸收光波长的关系 8.2 朗伯-比尔定律 3 分光光度法 可见光分光光度法的测定方法和原理与光电比色法相同，但获得单色光的方法不同。 光电比色法：滤光片 分光光度法：棱镜、光栅 分光光度法采用的仪器是分光光度计。 （3）吸收池 也叫比色皿, 用于盛装参比溶液和待测溶液，能透过所需光谱范围内的光线。 （4）检测系统 检测器 将透射光信号转化为电信号进行测量的装置。光电管（灵敏度高、不易疲劳）。 指示器 把放大的信号以适当的方式显示或记录下来。和检测器一起组成检测系统。 8.3 吸光光度法的灵敏度与准确度 灵敏度的表示-摩尔吸光系数ε 例 0.0880mg Fe3+在酸性溶液中，以硫氰酸钾显色后，用水稀释到50.00ml，在480nm处用1cm比色皿测得吸光度A为0.220，计算该显色反应的摩尔吸光系数。 解 (1) 显色反应及其选择 将待测组分转变成有色化合物的反应叫做显色反应。 与待测组分形成有色化合物的试剂称为显色剂。 选择显色剂应考虑的因素： ① 灵敏度高：一般希望 ε 达到104 ~ 105 ② 选择性好：其它离子干扰少 ③ 显色剂在测定波长处无明显吸收 ④ 反应生成的有色化合物组成恒定，化学性质稳定。 无机显色剂 种类不多，主要有硫氰酸盐、钼酸铵等。 有机显色剂 有机显色剂种类很多，主要可分为： 偶氮类显色剂 如偶氮胂Ⅲ 三苯甲烷类显色剂 如结晶紫 其它有机显色剂 如丁二酮肟 显色剂用量 反应体系的酸度 显色反应的温度 显色反应的时间 干扰的消除 （2）吸光度测量条件的选择 入射光波长的选择 入射光的波长根据吸收光谱选择，选择的原则是吸收最大，干扰最小。 一般情况下选择被测溶液的最大吸收波长为入射光波长。这样测定的灵敏度和准确度都较高。 如果干扰物质在最大吸收波长处有强烈的吸收，则可选其它波长，但要注意尽可能选择值随波长改变而变化不太大的范围内的波长。 参比溶液的选择 在吸光度测量中，将发生反射、吸收和透射等作用，由于反射以及溶剂、试剂等对光的吸收会造成透射光的减弱，为使光强度减弱仅与溶液中待测物质的浓度有关，必须进行校正。 校正方法：采用光学性质完全相同、厚度相同的比色皿贮放参比溶液，调节仪器使透过参比皿的吸光度为零。 参比溶液的选择方法： （1）如果仅所测物质有吸收，其它试剂均无吸收，则可用纯溶剂做参比溶液； （2）如果显色剂或其它试剂略有吸收，应用空白溶液（不加试样溶液）做参比溶液； （3）如果试样中其它组分有吸收，但不与显色剂反应，则当显色剂无吸收时，可用试样溶液做参比溶液；当显色剂略有吸收时，或干扰离子也与显色剂反应时，可在试液中加入掩蔽剂后再加显色剂，以此溶液作为参比。 吸光度读数范围的选择 当 T = 0.368（A=0.434）时，浓度测定的相对误差最小。 浓度相对误差的大小和透光度读数范围有关。当所测吸光度 A 在0.2 ~ 0.8 内，仪器本身所带来的浓度测量误差≦5%。 * * 特点：灵敏度高，微量、痕量组分（10-4-10-5%）；准确度高，2%-5%。 知识点： 1 单色光 复合光 互补光 吸收曲线、标准曲线 3 吸光度、透光率及其关系 4 朗伯-比尔定律的应用（计算） 5 分光光度计的基本组成部件 6 吸光光度法的灵敏度-摩尔吸光系数及其计算 7 影响测定结果准确度的因素（了解） 8 显色反应和测定条件的选择（了解） 紫外光：（10-400nm） 可见光：（400-760nm） 红外光 ： (0.76-300um) 单色光：单一波长的光。 复合光：