DNA的粗提取研讨.pptVIP

DNA的粗提取 ⑴ DNA的溶解性 DNA和蛋白质等成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同 一、提取DNA的原理 选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解，使杂质沉淀；或让其他成分溶解，DNA析出 DNA不溶于酒精溶液， 但细胞中某些蛋白质则溶于酒精。 将DNA与蛋白质进一步分离。 ⑵ DNA不溶于酒精溶液 ⑶ DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性 ① 蛋白酶——水解蛋白质,对DNA没有影响 ② 高 温——大多数蛋白质不能忍受60～80℃ 而DNA在80℃以上才会变性 ③ 洗涤剂——溶解细胞膜，去除脂质和蛋白质 但对DNA没有影响 二、实验方法及注意事项 （一）实验材料的选取 （二）破碎细胞，获取含DNA的滤液 1.提取鸡血细胞的细胞核物质 2.溶解细胞核内的DNA 三、实验步骤 将制备好的鸡血细胞液5ml~10ml，注入到50ml烧杯中。向烧杯中加入蒸馏水20ml，同时用玻璃棒充分搅拌5min，使血细胞加速破裂。然后，用放有纱布的漏斗将血细胞液过滤至1000ml的烧杯中，取其滤液。 将氯化钠的物质的量浓度为2mol/L的溶液40ml加入到滤液中，并摇动烧杯，使其混合均匀，这时DNA溶液中呈溶解状态。 ⑶.析出含DNA的粘稠物： ⑷.滤取含DNA的粘稠物： ⑸. DNA粘稠物的再溶解： 在上述溶液中缓缓加入蒸馏水，并沿一个方向轻轻搅拌，出现丝状物；当丝状物不在增加时，停止加水（此时NaCl溶液的浓度相当于0.14mol/L）。 用多层纱布过滤，含DNA的粘稠物留在纱布上。 20mL2mol/L的NaCl溶液 步骤⑷含DNA的粘稠物 在20mL烧杯中轻缓搅拌3min，使尽可能多的DNA溶解在NaCl溶液。 ⑹.过滤含有DNA的NaCl溶液： 用放有两层纱布的漏斗过滤步骤⑸所得的溶液，滤液中含有DNA。 ⑺.提取含有杂质较少的DNA： 步骤⑹所得的滤液＋体积分数为95%的冷却酒精50mL，用玻棒沿一个方向轻缓搅拌，溶液中（析出）出现乳白色丝状物，用玻棒将丝状物卷起，并用滤纸吸取上面的水分。 3.DNA的鉴定： 加入二苯胺试剂4mL，用玻棒搅拌使DNA溶解，沸水浴5min，观察溶液是否出现浅蓝色。 1.共有“三次过滤，两次析出，七次搅拌” 2.加入“两次蒸馏水，三次NaCl溶液，一次酒精” 实验小结 试剂： （二）DNA的鉴定 条件： 二苯胺 沸水浴 1. DNA的鉴定的原理 沸水浴条件下，DNA遇二苯胺被染成蓝色 现象： 2. DNA的鉴定 ⑴ 向两支试管中分别加入 2mol/L NaCl 溶液5ml ⑵ 其中一支试管中加入DNA丝状物 ⑶ 各加入二苯胺试剂4ml ⑷ 混匀后，置于沸水浴中加热5min ⑸ 待冷却后，比较两只试管中溶液的颜色变化 观察现象： 溶解丝状物的溶液变为蓝色 方法步骤 加入物质 目的 1 . 制备鸡血细胞液 柠檬酸钠溶液 ① 2 . 提取鸡血细胞细胞核物质 20 m1 蒸馏水 ② 3 . 溶解细胞核内的 DNA 2 m1 ／ L 的 NaCI 溶液 40 mL ③ 4 . 析出含 DNA 的黏稠物 蒸馏水 ④ 5 . 滤取含 DNA 的黏稠物 ⑤ 6 . 将 DNA 的黏稠物再溶解 2 mol ／ L 的 NaCl 溶液 20 mL ⑥ 7 . 过滤含 DNA 的 NaC l 溶液 ⑦ 8 . 提取含有杂质较少的 DNA 冷却的 95 ％的酒精 50 mL ⑧ A : (1) 向试管中加入 0 . 015 mol ／ L 的 NaCl 溶液 5 mL (2) 加入 DNA (3)4 mL 二苯胺试剂 9 . DNA 的鉴定 B : (1) 向试管中加入 0 . 015mol ／ L 的 NaCl 溶液 5 mL (2)4 m L 二苯胺试剂 ⑨ ①加入柠檬酸钠溶液的目的是防止血凝固 ②加速血细胞破裂 ③溶解DNA ④使2mol/L的NaCl溶液稀释至0.14mol/L使得DNA最大限度地释出 ⑤使含DNA的黏稠物被留在纱布上 ⑥使含DNA的黏稠物尽可能多的溶解于溶液中 ⑦除去含DNA的滤液中的杂质 ⑧提取DNA ⑨ A出现蓝色 B无变化 1.在DNA的粗提取实验过程中，两次向烧杯中加入蒸馏水的作用是( B )。 A.稀释血液、冲洗样品 B.使血细胞破裂、降低NaCl浓度使DNA析出 C.使血细胞破裂、增大DNA溶解量 D.使血细胞破裂、提取含杂质较少的DNA 2.提取鸡血中的DNA时，为什么要除去血液 中的上清液? 答：DNA的提取，关键