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从腹腔灌洗液中分离胃癌干细胞的可行性及其意义 中文摘要 从腹腔灌洗液中分离胃癌干细胞的可行性及其意义 中文摘要 【摘要】背景：肿瘤干细胞研究的前提和基础是能够分离并培养相应肿瘤类型 的干细胞或干细胞样细胞。由于肿瘤干细胞的分子标志物还不精确以及人为因素的干 stem 扰都为肿瘤干细胞的分离鉴定提出了更高的要求。目前胃癌干细胞(cancer 性肿瘤细胞在形态上难以区别。常规的实验流程由于对实体瘤采用了蛋白酶消化、机 械分离等复杂的步骤，破坏了癌细胞生长的原始微环境。因此，努力找到一种自然病 理状态下的胃癌干细胞将有重大意义。目的：先从人胃腺癌细胞系AGS中分离CD44+ 细胞并体外培养。探讨CD44+细胞是否具有肿瘤干细胞特性。再探讨从腹腔灌洗液中 分离胃癌干细胞的可行性及其意义。方法：第一部分首先用磁激活细胞分选法(]VlACS) 外培养，通过传代更新、交替在含血清／无血清培养液中培养等方法鉴定悬浮成球细 胞具有强增殖性、自我更新和分化潜能等肿瘤干细胞特性。第二部分随机选择45ff0胃 癌患者，术中发现有腹膜转移8例，无腹膜转移37例。用流式细胞仪及免疫组化检测 胃癌组织、腹膜转移灶中CD44及CD44V6的表达。同时流式细胞仪检测胃癌术中腹腔灌 洗液中CD44和CK20的表达，并比较有、无腹膜转移两组之间差别是否有显著性。结果： (1)MACS分选CD44+细胞纯度达99．2％。(2)CD44+细胞在SFM中悬浮成球率为31％， 而CD44一细胞不能成球。CD44+成球细胞还可以继续传代，在完全培养液中培养可分化 织中CD44BD性表达率与浆膜浸润、淋巴结转移等病理因素有关；该两因素分组间差异 癌组织中CD44V6阳性表达率与浆膜浸润、淋巴结转移等病理因素有关；该两因素分组 (P 间差异有显著性(PO．05)。(4)CD44在胃癌和腹膜转移灶中的表达无差异， T 一t，文摘要 从腹腔灌洗液中分离胃癌干细胞的可行性及其意义 高，可以立即用于细胞培养。 (2)从人胃腺癌细胞系AGS中分离的CD44+细胞具有肿 (3)人胃癌组织可能包含胃 瘤干细胞特性，CD44可以作为胃癌干细胞标志物之一。 癌干细胞，并导致腹膜转移， (4)从胃癌腹腔灌洗液游离癌细胞中分离胃癌干细胞 是可行的，这种可行性为人胃癌干细胞的分离提供了新的思路，为制定胃癌腹膜转移 的靶向治疗提供了一定的实验基础。 【关键词】胃肿瘤；腹腔游离癌细胞；癌干细胞(CSC)；CD44；磁激活细胞分 选法；悬浮细胞聚球法；CK20；免疫组化 作 者：张岩松 指导老师：李德春 Isolationof cancerstemcellsfromfreecancercellsin washes Abstract gastric peritoneal IsolationoIof Cancercancerstemstemcellscellsfromfromfr| t三astric treeCancer gastric cellsin washes andits peritoneal significance A