低pH孵放法灭活生物制品中慢嗜性小鼠白血病病毒方法学研究.pdf

目 录 摘 要………………………………………………………………………………1 Abstract…………………………………………………………………………………………………………．．5 英文缩略语……………………………………………………………………………7 综述一…………………………………………………………………………………9 生物制品安全性概述…………………………………………………………………9 1 综述二………………………………………………………………………………．．1 生物制品安全评价相关法规概述…………………………………………………．．11 3 综述三………………………………………………………………………………一l 生物制品中病毒灭活方法研究概况………………………………………………．．13 综述四………………………………………………………………………………．．19 逆转录病毒及逆转录酶检测方法研究概况………………………………………．．19 前日U 言………………………………………………………………………………………………………．25舌………………………………………………………………………………………………………．Z) 实验研究……………………………………………………………………………．．29 第一部分X．MulV体外培养及活性评价体系的建立…………………………29 第二部分低pH法灭活生物制品中X—MulV方法的建立……………………．．39 1最佳pH值、温度及时间的筛选………………………………………………．39 2蛋白质浓度对X—MulV灭活效果影响的研究…………………………………47 4pH值、温度、时间允许范围考察……………………………………………．．52 4．1 3．60～3．90范围的考察……………………………………………………52 pH 4．2(25+2)℃温度范围的考察…………………………………………………53 4．3(0～240)min时间范围的考察……………………………………………54 5最佳灭活条件对X．MulV逆转录酶活性的影响………………………………57 6低pH对重组人TNF一0L融合蛋白生物学活性的影响…………………………64 7最佳灭活条件对X．MulV包膜基因eF／v表达的影响…………………………68 第三部分人重组TNF．Gt融合蛋白中X．MulV灭活验证检验……………………75 讨 论……………………………………………………………………………．．79 结{仑………………………………………………………………………………………………………．89 参考文献……………………………………………………………………………．．91 致{射……………………………………………………………………………………………………．．101 个人简历……………………………………………………………………………103 附 录……………………………………………………………………………105 中医药科研项目查新报告书…………………………………………………105 低pH孵放法灭活生物制品中异嗜性小鼠白血病病毒的方法学研究 摘 要 生物制品包括血液制品、基因制品、病毒类疫苗等，为了提高生物制品临床 使用的安全性，生产工艺要具有一定的去除或灭活部分病毒的能力，生产过程中 应有特定的去除或灭活病毒的方法。重组融合蛋白属于基因制品的一种，目前上 Hamster 蛋白主要以中国仓鼠卵巢细胞(ChineseOvary，CHO)作为表达载体。 目前，CHO细胞表达抗体药物已经产业化。然而，CHO细胞内本身存在内源性 逆转录病毒，这一结论已经得到证实；但这种内源性逆转录病毒对人类不具有致 病性。尽管这种内源性逆转录病毒对于人类是非致病性的，但采用CHO细胞作 为药用蛋白质的表达载体，其分泌的蛋白质对于人用药的安全性仍然具有的一定 潜在风险。因此，各国新药研发相关法规要求对于CHO细胞来源的药用蛋白质， 其生产工艺中必须具备病毒去除或