分光光度法在职业卫生检测中的应用20131028解答.pptx

紫外-可见分光光度法在职业卫生检测中的应用姜素霞2013年10月熟悉紫外可见分光光度法相关基本概念熟悉紫外可见分光光度法的基本原理掌握紫外可见分光光度计的仪器组成、分析测试条件选择、分析方法及注意事项分光光度方法分类紫外-可见分光光度原理及仪器构成紫外-可见分光光度法分析条件的选择紫外-可见分光光度法的应用常见问题及注意事项光，或称电磁辐射，具有两重性质：（1）它是通过空间传播的一种波,具有波动性。（2）它又是由粒子（光子）组成的，具有粒子性。光子是非连续的（离散性的）能束。对包含大量数目的光子的行为，光的波动性是主要的；当对个别原子产生辐射效应时，把光子作为能束是主要的。分光光度方法分类光谱分区(穿透)能量小200nm400nm760nm大波长光谱区域紫外光区可见光区红外50μm紫、蓝、青、绿、黄、橙、红分光光度方法分类分光光度方法分类荧光分光光度计既可用于定量分析，也可用于测绘激发光谱和荧光光谱。第一单色器选择激发光波长（＞250nm的紫外光），故称为激发单色器。第二单色器（荧光单色器）与激发光入射方向垂直，并选择荧光波长，可提高方法的选择性和准确度。分光光度方法分类荧光分光光度法灵敏度高较紫外-可见分光光度法高1-3个数量级。选择性强能吸收光的物质并不一定能产生荧光，且不同物质由于结构不同，虽吸收同一波长的光，但产生的荧光波长也不尽相同。用样量少、操作简便缺点:许多物质本身不会发射荧光应用不够广泛受外界条件影响大铍：桑色素荧光分光光度硒：二氨基萘荧光分光光度分光光度方法分类荧光分光光度法特点物质吸收紫外和可见光区电磁波而产生吸收光谱——紫外-可见吸收光谱。波长（200～400）nm范围称为紫外光区，波长（400～760）nm称为可见光区。分光光度方法分类为什么可以达到检测的目的？产生吸收光谱的原因分子具有不同的特征能级，当分子从外界吸收能量后，就会发生相应的能级跃迁。同原子一样，分子吸收能量具有量子化特征，记录分子对电磁辐射的吸收程度与波长的关系就可以得到吸收光谱。分光光度方法分类紫外-可见吸收光谱法是一种分子光谱法。该法广泛运用于无机物质、有机物质定性和定量分析二、紫外-可见吸光光度原理及仪器构成分光光度法测量的理论依据：朗伯—比尔（Lambert-Beer）定律当溶液中的物质在光的照射和激发下，产生了对光吸收的效应。物质对光的吸收是有选择性的，各种不同的物质都有其各自的吸收光谱。ε：比例常数，与吸光物质的性质、入射光波长及温度等有关。A：吸光度，表征物质对光吸收程度的量。C：溶液浓度；I0：入射光强；It：透射光强；b：液层厚度；T：透光率或透光度朗伯-比尔定律表达式二、紫外-可见吸光光度原理及仪器构成当一束单色光穿过透明介质时，光强度的降低同吸收介质的厚度（或光径长度）、溶液的浓度成正比。溶液的透光率愈大，表示它对光的吸收愈小溶液的透光率愈小，表示它对光的吸收愈大二、紫外-可见吸光光度原理及仪器构成摩尔吸光系数ε它是吸光物质在特定波长下的一个特征常数。在数值上等于1mol·L-1吸光物质在1cm光程中的吸光度。其单位为L·mol-1·cm-1。由于ε值与入射光波长有关，故表示ε时，应注明所用入射光波长。二、紫外-可见吸光光度原理及仪器构成朗伯-比尔定律A=-lgT=εbc适用于单色光、稀溶液回顾在分析化学中，ε值的大小反应了吸光物质对某一特定波长光吸光能力大小。ε值越大，该吸光物质的吸光能力越强。ε值是衡量光度分析方法灵敏度的重要指标，ε值越大，方法的灵敏度越高。二、紫外-可见吸光光度原理及仪器构成回顾五个单元组成光源单色器样品池检测器记录装置二、紫外-可见吸光光度原理及仪器构成吸收池讯号处理和显示器1.光源在整个紫外光区或可见光谱区可以发射连续光谱，具有足够的辐射强度、较好的稳定性、较长的使用寿命。钨灯或卤钨灯——可见光源（350~1000）nm氢灯或氘灯——紫外光源（200~360）nm二、紫外-可见吸光光度原理及仪器构成2.单色器是将光源发射的复合光分解成单色光并可从中选出一任波长单色光的光学系统。包括5部分。①入射狭缝：光源的光由此进入单色器；②准光装置(准直镜)：透镜或返射镜使入射光成为平行光束；③色散元件（分光镜）：将复合光分解成单色光；过滤、棱镜或光栅；④聚焦装置：透镜或凹面反射镜，将分光后所得单色光聚焦至出射狭缝；⑤出射狭缝：射出单色光。二、紫外-可见吸光光度原理及仪器构成二、紫外-可见吸光光度原理及仪器构成3.样品室(吸收池)样品室放置各种类型的吸收池（比色皿）和相应的池架附件。吸收池主要有石英池和玻璃池两种。在紫外区须采用石英池，可见区一般用玻璃池。玻璃——能吸收紫外光，仅适用于可见光区石英——不能吸收紫外光，适用于紫外和可见光区二、紫外-可见吸光光度原理及仪器构成4.检测器利用光电效应将透过