微生物的实验室培养2课程方案.ppt

2．纯化大肠杆菌 (1)微生物接种的最常用方法是 和 。 (2)平板划线法：通过 在琼脂固体培养基表面 的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到 。 (3)稀释涂布平板法：将菌液进行一系列的 ，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。当稀释倍数足够高时，即可获得 。;接种环;平板划线的操作;;菌落特征因种而异;2．平板划线操作 (1)第一次划线及每次划线之前都需灼烧接种环灭菌，划线操作结束仍需灼烧接种环，每次灼烧目的如下表：;(2)灼烧接种环之后，要等其冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种。 (3)划线时最后一区域不要与第一区域相连。 (4)划线用力要大小适当，防止用力过大将培养基划破。 3．在做第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？ 答案　划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。;稀释涂布平板法;a．将分别盛有9 mL水的6支试管灭菌，并按101～106的顺序编号。 b．用移液管吸取1 mL已培养的菌悬液，注入第二支试管中。用手指轻压移液管上的橡皮头，吹吸三次，使菌悬液与水充分混匀。 c．从101倍稀释的试管中吸取1 mL稀释液，注入102倍稀释的试管中，重复第2步的操作。以此类推，直到完成最后一支试管的稀释。 注意：移液管需要经过灭菌。操作时，试管口和移液管应在离火焰1～2 cm处。;涂布分离法：取3个平板，底面分别用记号笔写上10－4、10－5和10－6三种稀释度，然后用无菌吸管分别吸取相应稀释度的稀释液各0.1 mL，放入已标记好的平板上，用无菌玻璃涂棒在培养基表面轻轻地涂布均匀，室温下静置5～10 min，使菌悬液吸附进培养基(图3)。 ③培养 将划线或涂布接种的平板倒置于培养箱或温室中37 ℃培养16～24 h，即可长出单菌落(图4);涂布器;(2)涂布平板时：稀释涂布平板的操作比较复杂，且各个细节均需保证“无菌”，应特别注意： ①酒精灯与培养皿的距离要合适； ②吸管头不要接触任何其他物体； ③吸管要在酒精灯火焰周围使用。;特别提醒 (1)移液管需要经过灭菌。操作时，移液后用手指轻压上端的橡皮头，吹吸三次，使菌液与水充分混匀。 (2)将涂布器末端浸在盛有体积分数为70%的酒精的烧杯中。取出时，要让多余的酒精在烧杯中滴尽，然后将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃。 (3)操作中一定要注意防火！不要将过热的涂布器放在盛放酒精的烧杯中。以免引燃其中的酒精。;(2)稀释涂布平板法：将菌液进行一系列的梯度稀释,然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。 3．结果分析 (1)如果接种大肠杆菌的培养基上生长的菌落颜色、形状、大小基本一致，说明接种操作符合要求。 (2)若培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中____________未达到要求。 (3)未接种大肠杆菌的作为对照的培养基， 37 ℃恒温箱中，培养12 h和24 h，在培养过程中若长出菌落，则说明培养基_______不彻底，实验失败。;【互动探究】　(1)平板划线法和稀释涂布平板法有何区别？ (2)纯化大肠杆菌时需要注意哪些问题？ 【提示】　(1)这两种方法都是分离微生物的方法。如果需要分离的微生物在混合样品中数量很少时，使用平板划线法分离很难奏效；若采用稀释涂布平板法则能使分离对象在选择培养基上大量繁殖，得到所需的微生物。;(2)①每次划线之前都要将接种环上的剩余物质烧掉以灭菌，整个操作完成后也要将接种环灭菌。 ②接种环灼烧完成后，要等到其冷却后才能用于接种，以防培养基溶化、划线不整齐或杀死菌种。 ③第二次划线时，要从上一次划线的末端开始，使微生物随划线次数的增加而减少，并逐步分散，最后可在平板表面得到单个菌落。;④用涂布法接种时，将涂布器的末端浸在盛有体积分数为70%的酒精的烧杯中，取出时要让多余的酒精在烧杯中滴尽，然后将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃。 ⑤操作过程都要在火焰附近的无菌区进行。 ⑥整个过程中要注意防火。;思考感悟? 你还知道哪些微生物的接种技术？这些技术的核心是什么？ 【提示】　微生物接种技术很多，除了最常用的平板划线法和稀释涂布平板法外，还包括斜面接种、穿刺接种等方法。虽然这些技术的操作方法各不相同，但是其核心都是要防止杂菌污染，保证培养