微生物生化反应课程方案.ppt

鉴定细菌的生化反应主要有哪些类别 常用的生化试验操作方法与结果判断;不同细菌产生的酶不同，对底物的分解能力不同，代谢产物不同。 微生物生化反应是指用化学反应来测定微生物的代谢产物，生化反应常用来鉴别一些在形态和其它方面不易区别的微生物。 种类 碳水化合物代谢试验 蛋白质、氨基酸代谢试验 碳源利用试验 酶类试验 其他试验;原理：各种细菌含有不同的分解糖(苷、醇)的酶，对糖(苷、醇)分解能力也各不相同，可用来鉴别细菌。 方法：将待检细菌接种葡萄糖、乳糖或其他发酵管，35℃培养18～24h观察结果。 结果：首先确定细菌是否生长，细菌生长者培养基呈混浊状，再确定细菌对糖类分解情况 不分解糖，培养基颜色与接种前相比无变化，记录时以“-”表示； 分解糖产酸不产气，培养基中的指示剂变色，记录时以“+”表示； 分解糖产酸产气，除培养基中的指示剂变化外，液体培养基的倒管中还有气泡；若为半固体培养基，则培养基内出现气泡或琼脂断裂，记录时以“⊕”表示。;溴甲酚紫指示剂;糖氧化发酵(O-F)试验：该试验是由Hugh和Leifson创立，故又称Hugh-Leifson(HL)试验。 原理：细菌对糖的代谢，分为氧化和发酵2种类型，不分解葡萄糖的细菌，称为产碱型。利用此试验可区别细菌的代谢类型。 方法：取2支HL培养基。指示剂为溴麝香草酚蓝 ，煮沸10分钟以驱逐培养基中的氧气。冷却后将被检细菌接种到2支培养基中，其中一支加灭菌的液体石蜡或凡士林厚约lcm，置于35℃培养3～4天，观察结果。 结果：2管均不产酸(不变色)为阴性；2管均产酸(变黄)为发酵型；加液体石蜡管不产酸，不加液体石蜡管产酸为氧化型。 应用：绿脓杆菌为O型，产碱杆菌为产碱型 ;产碱型;原理：细菌分解乳糖依靠两种酶的作用，一种是半乳糖苷渗透酶，另一种为β-半乳糖苷酶。ONPG可迅速进入细菌细胞，被半乳糖苷酶水解，释出黄色的ONP，故由培养基液变黄可迅速测知β-半乳糖苷酶的存在。 方法：取一环细菌纯培养物接种在ONPG培养基上置37℃培养1～3h或24h 结果：如有β-半乳糖苷酶，会在3h内产生黄色的邻硝基酚；如无此酶，则在24h内不变色。 应用：大肠杆菌阳性，伤寒杆菌阴性;原理：某些细菌具有七叶苷酶，水解七叶苷后产生七叶素与亚铁离子反应形成黑色酚铁络合物，使培养基变黑。 方法：将被检菌接种于七叶苷培养基， 37℃培养18～24h 结果：培养基变黑为阳性，不变色为阴性 应用：D群链球菌为阳性，其他链球菌为阴性;原理：某些细菌分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸可进一步分解为甲酸、乙酸等酸性物质，故培养基pH在4.5以下，加入甲基红指示剂后呈红色(阳性)。有些细菌分解葡萄糖产生的酸进一步转化为醇、酮等非酸性物质，使培养基pH在6.2以上，加入甲基红试剂呈黄色(阴性)。 方法：将待检菌接种葡萄糖蛋白胨水培养基中， 37℃培养18～24h 结果：在培养物中加入甲基红指示剂2～3滴，立即观察，红色为阳性，黄色为阴性。 应用：大肠埃希菌阳性，产气肠杆菌阴性。 ;原理：某些细菌分解葡萄糖生成丙酮酸，进一步脱羧生成乙酰甲基甲醇，在碱性环境下被氧化成二乙酰，后者与蛋白胨中的精氨酸所含的胍基起作用，生成红色胍缩二乙酰，为VP试验阳性。若培养基中胍基含量少，加入少量含胍基的化合物如肌酸肌酐，以加速其反应。 方法：将待检接种于葡萄糖蛋白胨水中，37℃培养24～48h，于培养物中加入VP试剂（a-萘酚无水乙醇溶液和含肌酸或肌酐的氢氧化钾溶液）各1滴，充分摇动试管，观察结果。 结果：如立即或于数分钟内出现红色反应者为阳性；若为阴性应将试管置37℃中4h后再进行观察，仍无红色者为阴性。 应用：大肠埃希菌阴性，产气肠杆菌阳性。 ;原理:某些细菌能产生色氨酸酶，可分解蛋白胨中的色氨酸而生成靛基质(吲哚)，后者与对二甲氨基苯甲醛作用，形成红色的玫瑰靛基质(玫瑰吲哚)。 方法:将待检菌接种于蛋白胨水培养基中，经35℃培养24～48小时，取出后加上述试剂数滴，观察两层液面的颜色。 结果:出现红色液面为阳性，黄色液面为阴性。 应用:大肠杆菌为阳性，产气肠杆菌为阴性。;原理：有些细菌分解含硫氨基酸产生硫化氢，遇到培养基中铅离子和二价铁离子会产生黑色沉淀 方法：将待检菌接种于含铅或含亚铁离子培养基中，经35℃培养18～24h小时 结果：有黑色沉淀产生为阳性 应用：大肠杆菌阴性，变形杆菌阳性;原理：能产生尿素酶的细菌，能水解尿素生成氨和CO2，氨及其化合物使培养基呈碱性。 方法：将待检菌接种于尿素培养基中，置于35℃培养2～4小时或过夜，取出观察。如阴性者继续培养4天再观察。 结果：培养基呈红色反应为阳性；不变色或呈黄色为阴性。 应用：大肠杆菌阴性，变形杆菌阳性;原理：某些细菌(如变形杆菌属)，可产生苯丙氨酸脱氨酶，使苯丙氨酸脱氨生成苯丙