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荧光原位杂交技术;荧光原位杂交技术;原位杂交技术简介 in situ hybridization;原位杂交操作步骤;染色体标本制备;预处理;非放射性标记法;1. 0.5ml离心管中加入1ug探针DNA,加水置体系为16ul
2. 沸水浴中变性10min, 马上置于冰水中
3. 加入4ul DIG-High Prime(5x buffer; 50% glycerol;1 U/μl Klenow enzyme; 5x random primer mix; 1 mM each of dATP, dCTP, and dGTP; 0.65 mM dTTP; and 0.35 mM DIG-11-dUTP)
4. 混匀离心，置于37℃温育1小时~20小时
5. 65 ℃处理10min终止反应;染色体标本变性;1. 杂交液(50% 去离子甲酰胺, 2x SSC, 10% 硫酸葡聚糖, 50 mM 磷酸钠; pH 7)中加入标记的探针，每10ul杂交液含50ng探针
2. 探针95 ℃变性5分钟，置冰水中10分钟
3. 10ul杂交液加到标本上，盖盖玻片并封片
4. 湿盒中37℃杂交过夜;1. 2x SSC, 50%甲酰胺45 ℃洗3x5min
2. 2x SSC 37℃洗2x5min
3. TNT buffer [100 mM Tris-HCl (pH 7.5), 150 mM NaCl, 0.05% Tween 20] 37℃洗1x5min;1. TNT buffer冲洗
2. TNB buffer[100 mM Tris-HCl (pH 7.5), 150 mM NaCl,0.5% blocking reagent]
3. Anti-DIG-荧光素(2 μg/ml, in TNB)37℃30min
4. TNT buffer冲洗3x5min
5. 乙醇系列脱水,气干
6. DAPI染色10min
7. 加Vectashield封片,荧光显微镜下观察并照相;影响杂交的因素;;FISH技术的应用;荧光原位杂交技术新进展;; ;;; ; ; ; ; ; ; ;;;基因组原位杂交（GISH）;RNA-FISH;T-FISH;;小麦;;;;水稻BAC-FISH;
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