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基因工程 ;1.基因工程的概念
基因工程是指按照人们的愿望,进行严格的设计,通过__________和__________,赋予生物以__________的遗传特性,创造出符合人们需要的新的生物类型和生物产品。基因工程是在__________上进行设计和施工的,又叫做__________。;概念分析;基因工程诞生的理论基础分析:
1.基因拼接的理论基础
双链DNA分子的空间结构都是规则的双螺旋结构。;2.基因工程的基本工具
(1)“分子手术刀”—— __________
①来源:主要是从__________中分离纯化出来的。
②功能:能够识别双链DNA分子的某种__________的核苷酸序列,并且使每一条链中__________部位的两个核苷酸之间的__________断开,因此具有__________性。
③结果:经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式:__________和__________。;(2)“分子缝合针”——__________
①两种DNA连接酶(E?coliDNA连接酶和T4-DNA连接酶)的比较:
a.相同点:都缝合__________键。
b.区别:E?coliDNA连接酶来源于__________,只能将双链DNA片段互补的__________之间的磷酸二酯键连接起来;而T4DNA连接酶能缝合__________,但连接平末端之间的磷酸二酯键效率较__________。
②与DNA聚合酶作用的异同:DNA聚合酶只能将__________加到已有的核苷酸片段的末端,形成磷酸二酯键(DNA复制时)。DNA连接酶是连接__________的末端,形成磷酸二酯键(基因工程中)。;(3)另外还介绍几种酶
①解旋酶:在DNA复制或转录时破坏DNA碱基对间的氢键,从而将双螺旋打开。
②DNA水解酶:催化DNA水解。
③RNA聚合酶:在转录时将单个的核糖核苷酸连接成RNA单链。;(3)“分子运输车”——__________
使用运载体有两个目的:一是用它作为运载工具,将目的基因转移到宿主细胞中去;二是利用它在宿主细胞内对目的基因进行大量的复制(称为克隆)。
①运载体具备的条件
a.能在受体细胞中复制并稳定保存。
b.具有一至多个限制酶切点,供外源DNA片段插入。
c.具有标记基因,供重组DNA的鉴定和选择。
②最常用的运载体是__________,它是一种裸露的、结构简单的、独立于__________核区DNA之外,并具有__________的双链__________DNA分子。
③其他运载体:__________、__________。;;(3)PCR技术扩增目的基因
①原理:__________。
②过程
第一步:加热至90~95 ℃__________;
第二步:冷却到55~60 ℃,引物结合到互补DNA链;
第三步:加热至70~75 ℃,热稳定DNA聚合酶从引物起始互补链的合成。;(3)PCR技术与DNA复制的比较;①启动子:是一段有特殊结构的__________,位于基因的__________,是__________识别和结合的部位,能驱动基因转录出__________,最终获得所需的__________。
②终止子:也是一段有特殊结构的__________,位于基因的__________。
③标记基因的作用:是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因,从而将含有目的基因的细胞筛选出来。常用的标记基因是__________。;3.将目的基因导入受体细胞
(1)转化:目的基因进入受体细胞内,并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。;4.目的基因的检测与鉴定
(1)首先要检测转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因,方法是采用________________________________________。
(2)其次还要检测目的基因是否转录出了mRNA,方法是采用_____________________________________。
(3)最后检测目的基因是否翻译成蛋白质,方法是从转基因生物中提取蛋白质,用相应的抗体进行_________。
(4)有时还需进行______________的鉴定。如转基因抗虫植物是否出现抗虫性状。;;;一、基因诊断与基因治疗;2.基因治疗
(1)原理:
把正常的外源基因导入有基因缺陷的细胞中,达到治疗疾病的目的。病人细胞中既有缺陷基因,也有正常基因。
(2)方法:
①体外基因治疗:
先从病人体内获得某种相关细胞,进行培养,然后在体外完成基因转移,再筛选成功转移的细胞扩增培养,最后重新输入患者体内,这种方法叫做体外基因治疗。
②体内基因治疗:
直接向人体组织细胞中转移基因的治疗方法叫做体内基因治疗。
举例:基因治疗的过程(以镰刀型细胞贫血症的治疗为例);举例:基因治
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