PRRS实验室诊断监测汇编.ppt

PRRS实验室诊断监测技术  -----RT-PCR检测技术 ;主 要 内 容;动物病毒的组成;PRRS病毒粒子的结构;PCR 技术;概念;PCR技术简史;PCR技术简史;PCR技术简史;基本原理;;PCR反应条件;（2）引物浓度 0.1-0.5 ?mol/L 浓度过高易导致模板与引物错配,反应非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。 （3）Taq DNA聚合酶 0.5-2.5 U/50 ?l 酶量过高可引起反应非特异性扩增;酶量过少则合成产物量减少。;（4）dNTP dNTP浓度取决于扩增片段的长度 四种dNTP浓度应相等，如果有一种浓度不同于其他几种，就会引起错配。 浓度过高易产生错误碱基的掺入，浓度过低则降低反应产量 dNTP可与Mg2+结合，使游离的Mg2+浓度下降，影响DNA聚合酶的活性。 ;（5） Mg2+ Mg2+是DNA聚合酶的激活剂。 0.5mmol/L-2.5mmol/L反应体系。 Mg2+浓度过低会使Taq酶活性丧失、PCR产量下降； Mg2+过高反应特异性降低，出现非特异扩增。 Mg2+可与负离子结合，所以反应体系中dNTP、EDTA等的浓度影响反应中游离的Mg2+浓度。;2）循环参数 变性 一般情况下，93℃～94℃lmin