《DNA的粗提取与鉴定》精编.ppt

讨论2：怎样才能将细胞内的这些物质分离出来？ ;1、提取生物大分子的基本思路 ; DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同。; 利用该特点，选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反，以达到分离的目的。 ;（2）DNA在酒精溶液中的溶解性 DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精。利用这一原理，可以将DNA与蛋白质进一步分离;试剂：;（一）实验材料的选取;（一）实验材料的选取;（二）破碎细胞，获取含DNA的滤液; 经研磨可破碎细胞壁，使细胞核内的DNA释放。若研磨不充分，会使提取的DNA量变少，导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等。;为什么反复地溶解与析出DNA，能够去除杂质;讨论：方案二与方案三的原理有什么不同？;具体做法: 方案一：30mL滤液＋35gNaCl→同方向搅拌，DNA溶解→加入蒸馏水→DNA析出→过滤得到过滤物→放到2mol/LNaCl溶液中溶解→DNA-NaCl溶解液 方案二：30mL滤液＋嫩肉粉（木瓜蛋白酶）→静置10～15分钟→DNA滤液 方案三：30滤液→60～75℃处理→过滤获得DNA滤液;（四） DNA的析出与鉴定;2. DNA的鉴定;制备鸡血细胞液…………加柠檬酸钠，静置或离心 ↓ 破碎细胞，释放DNA… 加蒸馏水，同一方向快速通方向搅拌 ↓→过滤，除去细胞壁、细胞膜等。 溶解核内DNA………… 加入NaCl至2mol/L，同一方向缓慢搅拌 ↓ DNA析出……加蒸馏水至0.14mol/L，过滤，在溶解到2mol/L溶液中 ↓→除去细胞质中的大部分物质。 DNA初步纯化………与等体积95％冷却酒精混合，析出白色丝状物 ↓→除去核蛋白、RNA、多糖等。 DNA鉴定……………… 二苯胺，沸水浴，呈现蓝色;2.实验中NaCl的物质的量浓度为2 mol／L和0.14 mol／L对DNA有何影响?;3.DNA遇二苯胺(沸水浴)会染成( ) A.砖红色 B.橘黄色 C.紫色 D.蓝色