第十六章 RNA的代谢.ppt

Chapter 16 RNA Metabolism;● 转录（transcription） ● 转录单位（transcription unit） ● 对称转录和不对称转录 ● RNA聚合酶（RNA polymerase，RNA pol） ● 启动子（promoter） ● 终止子（terminator） ● RNA复制酶（RNA replicase） ● 反转录（reverse transcription）;● 四种核苷三磷酸（NTP）为底物； ● 以DNA为模板，模板可以是单链DNA、双链DNA，但 双 链DNA状态下活性最大； ● 聚合酶无校对功能(即外切酶功能)，错误率为 10-4 ~ 10-5 ● 聚合速度（E.coli）为 50 ~ 90 nt/min ● 聚合方向： 5’ →3’ ;RNA聚合酶全酶α2ββ’?σ;● 转录不需引物； RNA聚合酶无校对功能 ● 转录时双链局部解开，新生RNA链与模板链形成杂螺旋，转 录结束后，DNA双螺旋恢复，RNA释放。;转录时DNA双链局部解开;大肠杆菌RNA聚合酶各亚基的功能;●只转录 DNA 分子中的一个片段（称为转录单位或操纵子operon）； 哪个基因被转录与特定的时间、空间、生理状态有关。 ●双链 DNA 中只有一条链具有转录活性（称为模板链）。;不对称转录;原核生物的转录过程;转录示意图①;;转录示意图 ③;● 启动子（promotor）指RNA聚合酶识别、结合和开始转录的一段特定的DNA序列。 ● 启动子的序列结构的确定;由含 σ70 RNA 聚合酶全酶识别的典型大肠杆菌启动子;大肠杆菌RNA聚合酶的启动子;足迹法示意图;大肠杆菌不同的σ因子识别不同启动子;;● 终止子（terminator）：提供转录终子信号的DNA序列称为终止子。;不依赖ρ-因子的终止子：含富GC的回文序列和寡 聚 U 序列;不依赖ρ-因子的终止子的终止反应;依赖ρ因子和不依赖ρ因子终止的区别;;§4 真核细胞的RNA聚合酶;一、RNA聚合酶Ⅱ需要许多其它蛋白质因子;;二、 RNA聚合酶和转录因子在启动子上的组装;● 真核生物的启动子由转录因子识别而不是σ因子； ● 转录因子的种类繁多，如通用因子、上游因子和可诱导因子。 ● 增强子：能增强基因转录的顺式作用元件（DNA序列）， 但没有启动子功能，存在位置不定。 ● 顺式作用元件：存在于DNA分子上的调控转录的序列。 ● 反式作用因子：能与顺式作用元件结合而调控转录的蛋白质 因子，如转录因子。;真核 hnRNA 的启动子由三部分组成：TATA盒、CAAT盒、GC盒;三、RNA合成的起始 四、 RNA合成的延伸、终止和释放 五、RNA聚合酶Ⅱ活性的调节 六、DNA指导的RNA聚合酶能被选择性地抑制;RNA聚合酶抑制剂;§5 新生RNA的剪接和修饰;● 内含子（intron）：通常指基因中能被转录成前体转录物，但却不能成为mRNA组成成分的序列，也称插入序列或居间 序列（intervening sequence）。 ● 外显子（exon）：DNA 分子中编码 mRNA 某一部分序列的区域。在真核细胞中，其结构基因一般被若干插入顺序（即 内含子）所隔开，被隔开的每一部分均称为外显子。;1. Ⅰ型内含子的剪接过程; 转录初始产物（hnRNA）;;L19RNA或L19 IVS（含395个核苷酸）;四膜虫rRNA前体中内含子Ⅰ（L19RNA）的二级结构;L-19 IVS functions as a real catalyst in the test tube; 因发现断裂基因而获1993年诺贝尔生理学奖的Richard J Robert and Phllip A Sharp;;3.hnRNA的剪接;U1 SnRNA含与内含子5’-端互补序列;;;二、真核生物mRNA的转录后加工; 细胞内RNA聚合酶的翻译水平远低于核糖体蛋白的翻译水平，将两者切开，有利于各自的翻译的调控。 类似的加工在某些噬菌体中也很常见。;原核生物的 mRNA 是一边转录一边翻译的（转录未结束，翻译已经开始）; 转录初始产物（hnRNA）;切除内含子与拼接外显子;4. ??同RNA拼接方式导致一个基因多种产物。;1. 5’ 端连接“帽子” 结构;真核mRNA的5’－“帽子”加工; 2.mRNA3’-“尾巴”的加工;三、不同RNA拼接方式导致一个基因多种产物;真核生物复杂转录产物的两种不同的剪接方式;四、rRNA和tRNA前体的转录后加工;Structure of E. coli 30S pre-rRNA;2.真核rRNA前体的加工;;● 核酸内切酶 tRNA 两端切断； ● 核酸