慢病毒介导bcrabl基因长期沉默对K562细胞生物学特性和姜黄素抗肿瘤作用影响及其相关机制研究.pdf

：、Ber／abl基因长期沉默对K562细胞生物学特性及榴关基因液达的影响 ber／abt墓嚣怒专翁爿＆发生、发震、转髑整窝褥关煞痪基篷。bcr／abl基霞长囊拜缺 席，可能导致K562细胞各种生物学特雠及相关信号分子表达的变能。本部分，我们 对照的EGFP．K562细胞进行比较，分析冀主要生物学特性及信号分予的变化。 磷究方法； 1≥鬟交簦染慧注裣溺熬魏壤墓篷办变霓；《2 集薄绺爨法黧察ILNAi 对集落形成能力的影响； 3 联苯胺染色观察细胞分化； 4 流式细胞仪分析细胞周 麓变纯；《耋≥ELISA装捡测蠹囊c酸激簿活缝；≤≤≥AO-EB、Heochst33342染毽麓察缨 胞凋亡# 7 比悒法检测Caspase。3、Caspase．9活性； 8 Westernblotting法观察RNAi 黠囊麓增疆灞亡檩关臻母势子瓣影璃。 络果显示； 1 bcr／ablRNAi显著抑制K562纲胞增殖，细胞倍增时间明恩延长； 2≥bcr／abl RNAi撵裁絮臆集薄形成，纂落澎袋簿镅拳遮籍．越鞴；《3 ber／abt轮漱i 缵麓蔺裁避滞在S鬻，密现灏亡的受二赞体蜂；≤5 bcr／abl装鬻轰i爱懿氮酸激黧 活性降低约41．88％； 6 bcr／ablRNAi诱镣K562细胞凋亡，自发凋亡率达忿6．67％； ≯≥bcr／abt 敝线糙体途襁诱导纲胞凋亡； 8 bcr／ablRNAi下调K562细胞Src、P．Src、 l、P-Star 90含量，上调羚3、 Raf-1、P-Erku2、P-Star 5、P_P38、C-myc、Bcl-2帮Hsp 70影螭不太。 PKC及Bax禽爨，对Erkv2、P-Akt、NF．憋、Hsp 墨、慢瘸枣舟导berlabl基因长期沉默对K562缨腱裰鬣成癀的影嗡及棚关枧制 研究 幔瘸毒介譬戆RNA干扰，在律外能奥现bcr／abl基巡熊长期沉默，抑制K562细 胞增楚，诱导箕向成熟氯系缁魔分化，蓰避细脆褥亡。本帮分我们关注的是：B／A．K562 缨照在襟鼠体内然孬继续保持黠bcr／abl基因靛RNA干扰以殿成癌麓力彝捆美信号分 子懿燮纯。 移植瘸模型； 2 观察戚瘤情况，比较瓣瘤体积； 3 称爨离体瘩块质量、计算摔癀 7 6 HE染色光镜下观察肿瘤组织的形态结构； 7 免疫组织化学检测肿瘤组织 1、 90的蛋白含量。 Hsp P．Stat 90含量低于K562组及B／A．K562组。 1、Hsp 相关机制研究 导的RNA干扰阻断后，Cur针对K562细胞的抗肿瘤作用及作用机制有何改变。 形成法观察Cur对细胞集落形成的影响； 3 联苯胺染色法观察Cur对细胞分化的影 8 Western blotting观察Cur对细胞增殖和凋亡有关信号分子及伴侣蛋白的影响。 量依赖关系，Cur作用48小时，IC50分别为6．94、4．93、12．67ttg／ml； 2 Cur影响 促进分化作用被bcr／ablRNAi减弱； 4 Cur降低细胞PTK活性，bcr／ablRNAi可增 8 90蛋魏含量。 70、Hsp C-myc、PKC、Bcl-2、Hsp 绫浚上实验结果褥蒜如下结论： 1．慢病毒介导的bcr／abl干扰能够实现bcr／abl基因长期沉默，bcr／abl mRNA下调 裙。5％，P210bcr／abl-F调74．5％； 2．bcr／abl RNAi显著抑制K562细胞增殖，诱导其向成熟红系分化，显著降低PTK 活性，循线粒体途径诱导K562缎麓叁发漏亡； 3．bcr／abl RNAi抑制K562细胞增殖，诱导凋亡，作用机制可能与bcr／abl沉默， l、P—Star 90下谖， Src、P—Src、Raf-1、P—Erklrz、P—Stat 5、P-P38、C-myc、Bcl一2、Hsp P53、Bax上调有关； 4．慢病毒介导的RNAi在裸甄俸凑继续沉默bcr／abl基霆，翌著猕刺肿瘤生长， 诱导肿瘤组织凋亡和坏死，其抗肿瘤作用机制可能与bcr／ablRNAi及由之引起的 90、Bcl-2下调，Bax上调有关； Erkl／z、Src、P．Stat差、Hsp 凋亡； 90，可熊骂Cur在bcr／abl 下调P-Src、Raf-1、NF—KB、C-myc、PKC、Bcl一2、Hsp70、Hsp 沉默的背景下，诱导B／A-K562细胞凋亡，抑制增殖有关。 总之，慢病毒介罨的bcr／abIRNAi能够实现bcr／abl基因的长期沉默，抑制CML 细胞增殖，诱导凋亡，作必CML的分子靶向治疗具有潜在应用价值。Cur可在bcr／abl 疗理想选择。 关键词； 姜黄素RNA干扰慢瘸毒慢性粒细胞囱盘病bcr／ablK562细胞藏移植 癯增殖与凋亡； 嚣 o