2012级研究生生第四章放射性核素标记化合物2012-11-16资料.pptVIP

第四章 放射性核素标记化合物 第一节 概述;第四章 放射性核素标记化合物 第一节 概述;二、放射性核素标记化合物（一）放射性核素标记化合物的特点;二、放射性核素标记化合物（一）放射性核素标记化合物的特点（二）同位素标记与非同位素标记; （2）非同位素标记(non-isotopic labelling) ：非固有元素 131I---蛋白质、 125I---蛋白质 125I---类固醇激素 特点： 组成不完全相同 物理化学及生物特性有所改变;（三） 放射性核素标记化物的命名;（3）均匀标记（Uniform labeling） U-14C-葡萄糖 （4）全标记 （General labeling） G-3H-胆固醇;（5）双标记或多标记 （Double labeling and multiped labeling） C3H3-35S-CH2CH2CH(NH2)-COOH  13CH3-14COOH;放射性比活度 Specific activity 放射化学纯度 Radiochemical purity;（五）不稳定性 1.核衰变 2.辐射自分解 3.脱落 4.位移;碘标记化合物的基本特性 125I、131I、123I: 半衰期、能量适宜 125I、131I：价廉易得 125I：易于探测;碘标记化合物的基本特性 一、蛋白质与多肽的放射性碘标记技术 特点：苯环比直链易于标记且稳定 （一）基本原理 形式：Na*I--*I- --- *I2 或 *I+ （二）常用标记方法 分类：直接标记法间接标记法;Na *I 氧化剂 *I2或*I+ 酪氨酸残基;1.直接标记法(1)氯胺T法;氯胺T法注意事项 ① 氯胺T溶液应新鲜配制 ② 氯胺T 用量应严格控制 ③ 偏重亚硫酸钠也应新鲜配制、 1.5-2倍于氯胺T ④ pH7.4-7.8, 0.2-0.5M磷酸缓冲液 ⑤ 减少反应体积 ⑥ 反应时间：10s-3min ⑦ 室温进行;1.直接标记法 （2）乳过氧化物酶法;乳过氧化物酶法注意事项;1.直接标记法(3)固相氧化剂法;1.直接标记法(3)固相氧化剂法;② 氯甘脲(Iodogen)法 1，3，4，6-四氯3α,6α-二苯甘脲 将氯甘脲用氯仿溶解后涂于反应管底部，用N2气吹干，置-20oC冷藏备用。;③ Iodo-Beads法 将氯胺T的衍生物N-氯苯磺胺共价连接到无孔的聚苯乙烯小珠表面。;① 固相酶法 ② 氯甘脲(Iodogen)法 ③ Iodo-Beads法 ;1.直接标记法(4)N-溴替丁二酰亚胺 (N-Bromosuccinimide);三、蛋白质与多肽的放射性碘标记技术 1. 直接标记法 (1)氯胺T法 (2)乳过氧化物酶法 (3)固相氧化剂法 ① 固相酶法 ② 氯甘脲(Iodogen)法  ③ Iodo-Beads法  (4)N-溴替丁二酰亚胺 ;2. 间接标记法;2. 间接标记法优缺点;二、核酸的放射性碘标记技术;第三节 放射性标记化合物的纯化与鉴定;第三节 放射性标记化合物的纯化与鉴定;第三节 放射性标记化合物的纯化与鉴定;第三节 放射性标记化合物的纯化与鉴定;第三节 放射性标记化合物的纯化与鉴定;第三节 放射性标记化合物的纯化与鉴定;第三节 放射性标记化合物的纯化与鉴定;第三节 放射性标记化合物的纯化与鉴定;第三节 放射性标记化合物的纯化与鉴定;第三节 放射性标记化合物的纯化与鉴定;第三节 放射性标记化合物的纯化与鉴定; 特定组分峰的 各段放射性之和 ①标记率（%）= ——————————×100% 全层析谱 各段放射性之和;第三节 放射性标记化合物的纯化与鉴定;第三节 放射性标记化合物的纯化与鉴定;（四）生物活性和免疫活性的测定;三、标记化合物的辐射自分解与对策;H2O;三、标记化合物的辐射自分解与对策;三、标记化合物的辐射自分解与对策; 同位素??记与非同位素标记 蛋白质与多肽的放射性碘标 记技术的方法 标记化合物的提纯