植物利用光能的生理基础(2012级).pptVIP

综合实验2 植物利用光能的生理基础 一、实验教学目的 学习叶绿体色素的提取和定量测定的方法，并掌握分光光度计的使用方法。 了解叶绿体色素在植物光合作用中的光能吸收、传递和转换中的重要作用。 掌握叶绿体色素提取、分离方法，并了解它们的一些重要理化性质。 综合实验2 植物利用光能的生理基础 二、实验意义 植物体内叶绿素与光合作用及氮素营养有密切关系，在科学施肥、育种及植物逆境生理等研究上常需对其进行测定。 综合实验2 植物利用光能的生理基础 三、实验基本原理 一）提取和分离 1.提取 高等植物叶绿体内的色素包括叶绿素 叶绿素a和叶绿素b 和类胡萝卜素 叶黄素和胡萝卜素 两大类，它们不溶于水，但溶于有机溶剂，故常用丙酮或酒精等有机溶剂来提取。 综合实验2 植物利用光能的生理基础 三、实验基本原理 一）提取和分离 2.分离 纸层析法分离叶绿体色素是一种最简便的方法，其原理是当溶剂不断地从纸上流过时，由于混合物中各成分在两相 流动相和固定相 具有不同的分配系数，其移动速率不同，经过一定时间后，可以将样品中不同色素分开。 综合实验2 植物利用光能的生理基础 综合实验2 植物利用光能的生理基础 三、实验基本原理 （二）定量分析 根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在某一特定波长下测定其吸光度，即可计算出提取液中各种色素的含量。 综合实验2 植物利用光能的生理基础 三、实验基本原理 （三）理化性质 1.皂化反应 叶绿素是一种双羧酸 叶绿酸 与甲醇和叶绿醇形成的复杂酯。在碱的作用下，发生皂化作用，生成醇 甲醇与叶绿醇 和叶绿素的盐 皂化叶绿素 。生成的盐能溶于水，故可将叶绿素与类胡萝卜素分开。 综合实验2 植物利用光能的生理基础 三、实验基本原理 （三）理化性质 2.取代反应 在弱酸作用下，叶绿素分子中的镁为H+所取代，生成褐色的去镁叶绿素，后者遇乙酸铜则形成蓝绿色的铜代叶绿素。铜代叶绿素很稳定，在光下不易被破坏，故常用此法制作绿色多汁植物的浸渍标本。 综合实验2 植物利用光能的生理基础 三、实验基本原理 （三）理化性质 3.荧光现象 叶绿素吸收光量子转变成激发态的叶绿素分子，很不稳定，当其回到基态时可发出荧光。 综合实验1 矿质元素对植物的作用 四、仪器试剂 玻璃仪器： 1 大试管5根、中试管2根　 2 烧杯和漓管　 3 25ml容量瓶4个　 4 量筒2个　 5 指型管2根　 6 毛细管2根　 7 康维皿1个　 8 移液管5根　 9 吸液球2个　　 试剂： 1 96% 乙醇　 2 15% KOH甲醇溶液 3 蒸馏水 4 30%醋酸　 5 苯　 6 醋酸铜粉末 综合实验1 矿质元素对植物的作用 五、实验材料 1、小麦、玉米、棉花、蓖麻、烟草、向日葵等农作物叶片或叶柄； 2、黄瓜、茄子、辣椒、豆角、大白菜、萝卜等蔬菜绿叶、心叶、菜心、菜帮等； 3、八仙花、红叶石楠、木芙蓉、紫荆、珊瑚树等园林植物叶片或叶柄； 4、枫香、木荷、梧桐、泡桐等林木叶片或叶柄。 综合实验1 矿质元素对植物的作用 六、实验设计 测定叶绿体色素 叶绿素a、叶绿素b和类胡萝卜素 含量，比较不同植物的光合特性： 1、C3、C4和CAM植物； 2、草本和木本植物； 3、不同颜色植物； 4、同一种植物在不同环境； 5、同一种植物不同处理； 6、同一种植物不同生长时期等。 2.叶绿体色素的理化性质 （２）叶绿素的荧光现象 将浓的叶绿体色素提取液放入试管内，在直射光下观察色素溶液在透射光下及反射光下的颜色有何不同？ （３）光对叶绿素的破坏作用 将前面实验纸层析所得的色谱图纸，对半剪开，一半夹入书中，另一半放在强光下，0.5～1 h后，观察四种色素的颜色有何变化？ （一）叶绿体色素的提取及定量测定 按下式计算样品中各叶绿体色素的浓度 mg·L-1 ： Ca 13.95A665－6.88 A649 Cb 24.96A649－7.32 A665 Cx.c 1000A470－2.05Ca－114.8Cb /245 如果仅在652 nm波长下比色，则用 CT mg·L-1 A652×1000 /34.5计算叶绿素总浓度 （一）叶绿体色素的提取及定量测定 按下式计算样品中各色素的含量： 各种叶绿体色素的含量 mg·g-1 C×V /W 其中: C为上述各种叶绿体色素的浓度 mg·L-1 ； V为提取液总量 ml，若比色前进行了稀释，则应乘以 稀释倍数 ； W为样品鲜重 g 。 综合实验3 植物对逆境的生理响应 实验设计 要求学生自带玉米、烟草、羊蹄等植物材料利用实验室条件人为设置逆境与正常条件形成对照（如高温与常温，低温与常温，干旱与保湿等），分析逆境对植物生长的影响： （一）植物体内游离