2分子生物学资料.ppt

;基因（gene）;从遗传学史的角度看，基因概念大致分以下几个阶段;现代基因阶段 ——重新认识基因的阶段;根据其是否具有转录和翻译功能可以把基因分为三类;基因组（genome）;基因组的结构;基因组结构;基因组结构;不同生物体中DNA的大小　　;2 .1 染色体（Chromosome) 染色体 染色质 DNA 1 RNA 0.1 蛋白质 组蛋白 1 H1 H2A H2B H3 H4 非组蛋白 0.6;; 进化上的保守性 不同生物的组蛋白氨基酸组成十分相似。牛、猪、大鼠的H4氨基酸完全相同。牛和豌豆的H4序列只有2个氨基酸差异;鲤鱼和小牛胸腺的H3只差1个氨基酸。 保守程度：H1→ H2A、H2B → H3 、H4 无组织特异性 仅发现鸟类、鱼类及两栖类红细胞不含H1而含H5，精细胞组蛋白为鱼精蛋白是例外。 ;;2）非组蛋白的一般特性;; DNA是染色体的核心部分。DNA和RNA统称核酸。核酸的理化特性包括：稳定性、酸效应、碱效应、化学变性、热变性、紫外线吸收性、减色性复性、黏性、浮力梯度等。 1) DNA的变性和复性 变性（Denaturation) DNA双链的氢键断裂，最后完全变成单链的过程称为变性。 增色效应(Hyperchromatic effect) 在变性过程中，260nm紫外线吸收值先缓慢上升，当达到某一温度时骤然上升，称为增色效应。 融解温度（Melting temperature，Tm ) 变性过程紫外线吸收值增加的中点称为融解温度。生理条件下为85~95OC影响因素：G+C含量，pH值，离子强度，尿素，甲酰胺等;; 复性（Renaturation) 热变性的DNA缓慢冷却，单链恢复成双链。复性出现减色效应（Hypochromatic effect)。复性的速率与DNA的浓度和序列的复杂性有关。 Cot1/2 变性和复性是可逆的。以Co代表完全变性的DNA单链的起始浓度，在时间 t时的浓度变化是： dC/dt = kCo2 积分后 C/Co = 1/(1+kCot) k为复性的速度常数。 以C/Co 对Cot作图，得Cot曲线。当C/Co = 0.5， Cot值称为Cot1/2 。 Cot1/2与k 的关系为 k = 1/ Cot1/2 ;;2) C值反常现象（C-value paradox) C值是一种生物的单倍体基因组DNA的总量。 高等生物一般C 值高于低等生物，但有例外。即C值反常现象。两栖类比哺乳类高。真核生物含有大量的重复DNA是原因。 C-value paradox： ;;3) 单一序列和低度重复序列 4) 中度重复序列 5) 高度重复序列 6) 反向重复序列 7) 核酸的分子杂交 Some DNA does not encode protein. a gene is made of DNA (Avery) ;染色体中的核酸组成 ⑴不重复序列 在单倍体基因组里，这些序列一般只有一个或几个拷贝，它占DNA总量的40%－80%。不重复序列长约750－2000dp，相当于一个结构基因的长度。单拷贝基因通过基因扩增仍可合成大量的蛋白质，如一个蚕丝心蛋白基因可作为模板合成104个丝心蛋白mRNA，每个mRNA可存活4d，共合成105个丝心蛋白，这样，在几天之内，一个单拷贝丝心蛋白基因就可以合成109个丝心蛋白分子 。 ⑵中度重复序列 这类重复序列的重复次数在10－10000之间，占总DNA的10%－40%。各种rRNA、tRNA 及组蛋白基因等都属这一类。; 非洲爪蟾的18S、5.8S及28SrRNA基因是连在一起的，中间隔着不转录的间隔区，这些单位在DNA链上串联重复约5000次。在卵细胞形成过程中这些基因可进行几千次不同比例的复制，产生2×106个拷贝，使rDNA占卵细胞DNA的75%，从而使该细胞能积累1012个核糖体。 ;⑶高度重复序列——卫星DNA 这类DNA只在真核生物中发现，占基因组的10%—60%，由6—100个碱基组成，在DNA链上串联重复几百万次。由于碱基的组成不同，在CsCl密度梯度离心中易与其他DNA分开，形成含量较大的主峰及高度重复序列小峰，后者又称卫星区带（峰）。;;高等真核生物DNA无论从结构还是功能看都极为复杂，以小鼠为例： ?1.小鼠总DNA的10％是小于10bp的高度重复序列，重复数十万到上百万次/genome。 ?2.总DNA的20％是重复数千次、长约数百bp的中等重复序列。 ?3.总