4第四章酶分子修饰资料.ppt

Chapter 4 Modification of Enzyme Molecule;Contents of chapter 4;4.1 什么是酶分子修饰？;酶分子修饰的意义;4.2 酶分子修饰的基本要求和条件 ;酶分子修饰的条件;4.3 酶分子的修饰方法 ;(1) 酶的金属离子置换修饰;金属离子置换修饰的过程 ;(2) 酶的大分子修饰;用可溶性大分子，如聚乙二醇、右旋糖苷、肝素等，通过共价键连接于酶分子的表面，形成一层覆盖层。 例如：用聚乙二醇修饰超氧物歧化酶 ，不仅可以降低或消除酶的抗原性，而且提高了抗蛋白酶的能力，延长了酶在体内的半衰期从而提高了酶药效。 每分子核糖核酸酶与6.5分子的右旋糖酐结合，可以使酶活力提高到原有酶活力的2.25倍； 每分子胰凝乳蛋白酶与11分子右旋糖酐结合，酶活力达到原有酶活力的5.1倍 ;大分子修饰(共价)的过程;聚乙二醇是线性分子具有良好的生物相容性和水溶性，在体内无毒性、无残留、无免疫原性，并可消除酶的抗原性，使其末端活化后可以与酶产生交联，因而，它被广泛用于酶的修饰。;(3) 酶分子的侧链基团修饰;催化活性/非催化活性基团的修饰;常见基团的化学修饰反应：羧基;常见基团的化学修饰反应：氨基;常见基团的化学修饰反应：巯基;常见基团的化学修饰反应：咪唑基;常见基团的化学修饰反应：酚羟基;常见基团的化学修饰反应：胍基;常见基团的化学修饰反应：色氨酸吲哚基;(4) 酶蛋白主链修饰(肽链有限水解修饰);;b、胰蛋白酶原（trypsinogen）的激活 ;;c、胰凝乳蛋白酶原（chymotrypsinogen）的激活 ;氨基酸或核苷酸的置换修饰可以采用化学修饰方法，例如，Bender等成功地利用化学修饰法将枯草杆菌蛋白酶活性中心的丝氨酸转换为半胱氨酸，修饰后，该酶失去对蛋白质和多肽的水解能力，却出现了催化硝基苯酯等底物水解的活性。但是化学修饰法难度大，成本高，专一性差，而且要对酶分子逐个进行修饰，操作复杂，难以工业化生产。 现在常用的氨基酸置换修饰的方法是定点突变技术。定点突变（site directed mutagenesis）是20世纪80年代发展起来的一种基因操作技术。是指在DNA序列中的某一特定位点上进行碱基的改变从而获得突变基因的操作技术。是蛋白质工程（Protein Engineering）和酶分子组成??位置换修饰中常用的技术。定点突变技术，为氨基酸或核苷酸的置换修饰提供了先进、可靠、行之有效的手段。; ;(6) 酶分子的物理修饰 ;4.4 酶修饰后的性质变化;4.5 酶的定向进化;酶的合理设计;体外定向进化的意义;定向进化的原理;DNA改组和外显子改组;DNA改组原理;定向进化的选择策略;酶