遗传病的诊断(2.ppt

遗传病的诊断; 重 点;1. 产前诊断(prenatal diagnosis);第一节 病史、症状和体征;1. 系统、完整;第二节 系谱分析;第二节 系谱分析;第二节 系谱分析; 染色体检查： 染色体检查亦称核型分析（karyotype analysis）是确诊染色体病的主要方法。 一、染色体检查标本的来源： 主要取自患者的外周血和身体的各种组织；胎儿的绒毛、羊水中胎儿脱落细胞和脐血、受精卵卵裂细胞、皮肤等各种组织。 ;第三节 细胞遗传学检查; 三、方法：略 四、临床诊断标准： 15个分裂相，其中有2个异同将增倍。不仅对染色体的情况作出正确诊断，还要了解患者异常染色体的来源，而且对生育第二胎提供咨询。;第三节 细胞遗传学检查;第三节 细胞遗传学检查;X染色体;第三节 细胞遗传学检查;第四节 皮肤纹理分析;;;;;二、染色体病患者皮肤纹理特征; 基因突变引起的单基因病往往表现在酶和蛋白质的质和量的改变或缺如。因此，酶和蛋白质的定性定量分析是诊断单基因病或分子代谢病的主要方法。 ;苯丙酮尿症（PKU)（AR);分子代谢病可以从三个层次检测和分析;上海：1981～1987年对284,396名新生儿进行PKU筛查，查出PKU患儿15名，高苯丙氨酸血症4名。;第六节 基因诊断; 和传统的诊断方法主要差异在于直接从基因型推断表型，即可以越过产物（酶和蛋白质）直接检测基因结构而作出诊断，这样就改变了传统的表型诊断方式，故基因诊断又称为逆向诊断（reverse diagnosis）。 这一诊断方法不仅可对患者，还可以在发病前作出症状前基因诊断，也可对有遗传病风险的胎儿作出生前基因诊断。此外基因诊断不受基因表达的时空限制，也不受取材的细胞类型和发病年龄的限制。这一技术还可以从基因水平了解遗传病异质性，有效地检出携带者。因此近年来这一技术日新月异地迅速发展，并已经在遗传病诊断中发挥了巨大作用。 ;第六节 基因诊断; 定义： 应用分子生物学方法检测患者体内遗传物质的结构和功能变化而作出的或辅助临床诊断的技术，称为基因诊断。 ;基因诊断的原理 ;进行基因检测有两个必要条件： 一、是必需的特异的DNA探针； 二、是??需的基因组DNA。 当两者都变性呈单链状态时，就能进行分子杂交。;基因探针的定义： ;1、来自基因组中有关的基因本身，称为基因组探针（genomic probe）。 2、是从相应的基因转录获得了mRNA，再通过逆转录得到的探针，称为cDNA 探针（cDNA probe）。与基因组探针不同的是，cDNA探针不含有内含子序列。 3、可在体外人工合成碱基数不多的与基因序列互补的DNA片段，称为寡核苷酸探针。长约20个bp左右。; 探针的标记：放射性同位素标记（32P、35S）、地辛高、辣根过氧化物酶、生物素。 方法：缺口平移、六核苷酸引物标记法。;一、分子杂交;一、分子杂交;1、Southern 杂交法;Southern印迹杂交;一、分子杂交;; 聚合酶链反应 （polymerase chain reaction,PCR） ;PCR原理;PCR原理;PCR原理;PCR原理;PCR原理;PCR原理;PCR原理;PCR原理;PCR原理;预变性(93-95?C,2-5m);直接分析法;RFLP连锁分析;5.6 Kb 5.2 Kb 4.2 Kb 4.0 Kb;ASO斑点杂交;基因诊断的临床检测应用; 基因诊断在肿瘤检测中的应用：在许多肿瘤中存在的：癌基因 ras、myc等的突变；抗癌基因P53、Rb等的突变、丢失的检出。 基因诊断在个体识别中的应用：亲子鉴定、个体识别、法医物证。;　　产前诊断（prenatal or antenatal diagnosis）又称宫内诊断（intrauterine diagnosis）是对胚胎或胎儿在出生前是否患有某种遗传病或先天畸形作了准确的诊断。 　产前诊断的适应症的选择原则 　　一、是有高风险而危害较大的遗传病 　　二、是目前已有对该病进行产前诊断的手段。 ;第七节 产前诊断;几种主要产前诊断方法 ; 2、X线检查 ：主要用于检查24周以后胎儿骨骼先天畸形。但因X线对胎儿有一定影响，现已极少使用。; 　4、羊膜穿刺 ：（amniocentesis）亦称羊水取样。 最佳时间：是妊娠16－18周。 范围：经体外培养后，可进行染色体分析、酶和蛋白质检测、性染色质检查、提取DNA作基因分析，也可不经培养，用微量技术作酶和蛋白质分析或直接提取DNA作基因诊断。 ;方法：B超