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负性协同刺激分子 B7-H4 在 C3H10T1/2 移植治疗 EAE 中作用机制的研究 中文摘要 负性协同刺激分子 B7-H4 在 C3H10T1/2 移植治疗 EAE 中作用机制的研究 中文摘要 目的：通过体外实验探讨靶向干扰 B7-H4 分子前后 C3H10T1/2（以下简称 C3H10） 细胞对 T 细胞亚群的影响，并观察 C3H10 细胞的生存、增殖、迁移等生物学行为的 改变；进一步通过体内实验探讨 B7-H4 在 C3H10 细胞移植治疗小鼠 EAE 模型中体内 效应的机制。 方法：1、用慢病毒将 B7-H4 靶向 shRNA 转染至 C3H10 细胞构建小鼠 B7-H4 靶 向 shRNA 稳定转染的 C3H10 细胞(C3H10-B7-H4 细胞)，应用 Ki-67 检测靶向干扰 B7-H4 分子前后 C3H10 细胞增殖情况；用细胞计数法绘制生长曲线的变化，观察细 胞增殖能力的改变；应用流式细胞仪检测 B7-H4 对 C3H10 细胞表面趋化因子受体 CXCR4 的表达的影响，用划痕实验观察 C3H10 细胞迁移能力的改变；将转染前后的 细胞分别与小鼠脾脏淋巴细胞共同培养，用 ELISA 检测其对 T 细胞亚群的影响。 2、利用 MOG35-55 和完全弗氏佐剂制备小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE） 模型，将 n=50 只小鼠分为正常对照组（n=10）、EAE 组（n=10）、C3H10 组（移植 C3H10 细胞）（n=10）、C3H10-NC 组（移植 shRNA 对照质粒转染的 C3H10 细胞） （n=10）、C3H10-B7-H4 组（移植 C3H10-B7-H4 细胞）（n=10），之后每日对各组小 鼠进行神经功能缺损评分，在免疫后第 6 天，按 1×106/只细胞数量移植入分小鼠体内； 在小鼠发病的急性期及慢性加重期，用流式细胞仪检测各组小鼠外周血细胞上 B7-H4 的表达变化；用 ELISA 法检测外周血可溶性 B7-H4（sB7-H4）、IL-2、IL-17、IFN-γ、 IL-4 的表达变化；收集小鼠脾脏组织，流式细胞仪检测各组脾脏细胞上 B7-H4 的表 达变化；结合神经功能评分观察不同干预方式对 EAE 损伤组织??构和功能的影响， 明确 B7-H4 分子在 C3H10 移植治疗 EAE 体内效应的机制。 结果：1、B7-H4 靶向 shRNA 转染 C3H10 可抑制其 B7-H4 的表达；下调表达 B7-H4 后 C3H10 细胞内的 Ki-67 表达减少，达到对数生长期的时间延长，增殖能力减弱； 下调表达 B7-H4 后 C3H10 细胞表面趋化因子受体 CXCR4 表达减少，划痕愈合减慢， I 中文摘要 负性协同刺激分子 B7-H4 在 C3H10T1/2 移植治疗 EAE 中作用机制的研究 迁移能力减弱；下调表达 B7-H4 的 C3H10 细胞对淋巴细胞的分泌 B7-H4、IL-2、IL-17、 IL-4、IFN-γ的抑制作用减弱。 2、正常对照组小鼠未见发病，EAE 组小鼠发病时间较其他组早，并且神经功能 评分高；C3H10-B7-H4 组发病时间及神经功能评分均介于 C3H10 组及 EAE 组之间； EAE 组小鼠外周血及脾脏中 CD19+B7-H4+B 细胞数量均较正常组增加，C3