01-2014级硕士高级免疫学实验技术-概述.ppt

高级免疫学实验技术 2014级硕士研究生;免疫学实验技术概述;免疫学实验技术概述; 小调查-对免疫学实验技术的了解;免疫学实验技术概述;免疫学技术的范畴;免疫学检测技术的评价;免疫学实验技术概述;多克隆抗体 单克隆抗体 基因工程抗体 前两者常用于实验研究，而后者用于临床治疗研究。;多克隆抗体是通过免疫动物血清分离获得 优点：制备方法比较简单，价格低廉，制备所需时间短等 在确定新基因编码蛋白研究方面，仍然是首选抗体类型。但由于多克隆抗体含有针对多个抗原表位的抗体成分，也可能包括抗原变性后暴露的新抗原表位，因此，多克隆抗体在检测变性抗原——如采用Western Blot检测蛋白时，其效果比单克隆抗体更敏感。;缺点： 纯度差 易发生交叉反应 来源有限 所产生的抗体因动物个体差异滴度不同 不易标准化 因免疫动物血清中含有???常复杂的多种蛋白质成分，所以在进行实验室分析、检测之前，必须将其有效的抗体成分分离、纯化。;单克隆抗体(mAb)是通过B细胞杂交瘤获得 与多克隆抗体相比，单克隆抗体主要具有以下三个显著特点（优点）： ①高度均质性 ②高度特异性 ③来源稳定 不足： 制备方法比较复杂，价格昂贵，制备所需时间较长。 ;根据实验的目的不同，其分离、纯化的纯度要求也不同。 作为ELISA检测时的抗体，部分情况下饱和硫酸胺纯化即可； 最常使用的抗体是经过A蛋白(Protein A)亲和层析获得的IgG型抗体； 免疫放射测定的标记用抗体必须达到双级纯才可应用(亲和层析纯+SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳纯)。;单克隆抗体在制备过程中经过严格的筛选，因此应根据不同的应用目的选择不同单克隆抗体亚类，如标明供ELISA检测用的单克隆抗体，可能不适合Western Blot检测。 作为初学者尤其应该注意各类单克隆抗体标明的应用范围，而多克隆抗体一般情况下均有较宽的适用范围。;一抗和二抗;沉淀反应 凝集反应 免疫标记技术; 淋巴细胞的检测技术;细胞因子的检测技术;免疫学常用的分子生物学技术;mAb是由起始于一个B淋巴细胞的单克隆细胞系所分泌的，因此是一种每个抗体分子的结构(包括氨基酸排列顺序和空间构型)都相同的均质性抗体。;mAb只专一的识别抗原分子上单个抗原位点，因此容易获得特异性抗体，较少产生交叉反应。;可大量生产，当得到稳定分泌mAb的杂交瘤细胞系后，可置液氮中长期保存，需要时取出复苏，既可在体外培养中收获mAb，也可将杂交瘤细胞接种入同系小鼠腹腔内，然后从荷瘤小鼠的腹水中收获大量mAb。