斜带石斑鱼阿片黑素皮质素原全长cDNA克隆及序列分析_张为民.docxVIP

第 27 卷 第 6 期 水 生 生 物 学 报 Vol .27 , No .6 2 0 0 3 年 1 1 月 ACTA HYDROBIOLOGICA SINICA Nov ., 2 0 0 3 斜带石斑鱼阿片黑素促皮质素原全长 cDNA 克隆及序列分析 张为民1 张利红1 马广智2 张 勇1 (1.中山大学生命科学学院 , 广州 510275 ;2.华南师范大学生命科学学院, 广州 510631) 摘要 :通过构建斜带石斑鱼垂体 cDNA 文库和随机测 序 , 克 隆了其阿片 黑素促皮质 素原(Proopiomelanocortin , POMC) 全长 cDNA 。 斜带石斑鱼 POMC 全长 cDNA 为 863bp(含 Poly(A)), 编码的 POMC 多肽前体为 219aa 。 氨基酸序列比较 分析表明 :斜带石斑鱼 POMC 前体包含有促肾上腺皮质 激素(Adrenocorticotropin, ACTH), α-促 黑素(α-melanocyte stim- ulating hormone , α-MSH), β-促黑素(β-MSH), γ-促脂素(γ-lipotrophic hormone , γ-LPH), β-内啡肽(β-endorphin)等 , 但缺 失 了 γ-促黑素(γ-MSH)和大部分连接区 。 斜带 石斑鱼 POMC 与哺 乳动物 POMC 的 同源性为 39%— 42%左右 , 与鸟 类 的同源性为 42%左右 , 与两栖类的同源性为 36%— 41%, 与其 他鱼类 POMC 的同 源性为 38%— 77%。 斜 带石斑 鱼 和罗非鱼的 POMC 的 ACTH 功能区都为 40 个氨基酸残基 , 而其他脊椎动物为 39 个氨基酸残基 。 关键词 :斜带石斑鱼 ;阿片黑素促皮质素原 ;cDNA 克隆 中图分类号 :Q45 文献标识码 :A 文章编号 :1000-3207(2003)06-0625-06 阿片黑素促皮质素原(POMC)是动物脑和垂体 中多种活性肽类的共同前体 , 如 ACTH , MSH , β-内啡 肽等 。在动物体内 , 这些活性肽类是通过 POMC 基 因的组织细胞特异性表达和加工而产生 , 如在垂体 前叶 ACTH 细胞中 , POMC 被加工为 ACTH 和 β-促脂 素(β-LPH), 而在垂体中叶的促黑素细胞中 POMC 被 加工为 α-MSH , 类 促肾上腺 皮质素中 叶肽(Cortico- tropin-Like Intermediate lobe Peptide , CLIP), β-LPH 和 β-内啡肽[ 1] 。这些活 性肽类在动物的应急 、摄 食和 能量 代 谢 等 的 调 节 中 起 着 重 要 作 用[ 2 , 3] 。 目 前 POMC 的基因已从多 种不同动物中克隆 , 它 是一种 存在于所有脊椎动物的前腺垂体激素前体 。 在脊椎 动物中 , 鱼类 POMC 基因最具有多样性 。 在辐鳍鱼 类的进化过程中 , POMC 中的 γ-MSH 区域不断退化 , 以至在真骨鱼类 中 γ-MSH 区 域完全消失[ 4] 。 在一 些软骨鱼类 中 , 除 存在 α-、β-、γ-MSH 外 , 还发现 有 [ 5 , 6]  1 材料与方法 组织样 品 4 龄斜 带石斑 鱼(Epinephelus co- ioides Hamilton)购自广东省水产厅大亚湾鱼种增殖 中心的海水养殖基地 。 垂体取出后立 即置于液氮 中 , 带回实验室保存在 -80 ℃。 TM TM 试剂和酶 SMA RTTM cDNA Library Construction Kit 购自 CLONTECH 公司 。总 RNA 提取试剂 TRIzo- l Reagent 和 反转录酶 SuperScript Ⅱ 购自 GIBCO- BRL 公 司 。 包 装 文 库所 用 的 包 装 蛋 白 MaxPlaxTM Lambda Packaging Extract 购自 EPICENTRE TECHNOL- OG IES 公 司 。 质 粒提 取和 胶 回收 试剂 盒 为 Omega Biotek 产品 。除特别注明外 , 其余均为 国产分析纯 试剂 。 1.3 斜带石斑鱼垂体总 RNA 的提取 将垂体置于 0 .5mL TRIzolTM Reagent 中 , 用注射器匀浆后 , 根据厂 δ-MSH , 因此 , 深入研究鱼类 POMC 基因 , 对于阐 家提供的方法提取总 RNA , 并电泳检测 RNA 质量 。 明脊椎动物 POMC 的进化 , 以及 ACTH , MSH 和 β-内 啡肽等