3蛋白质的测定.ppt

饲料蛋白质的测定;蛋白质的测定;概 述;饲料中蛋白质的含量 数据库 参考值和实测值; 测定饲料中蛋白质的含量，对于评价饲料的营养价值、合理开发利用饲料资源、提高产品质量、优化饲料配方、指导经济核算及生产过程控制均具有极重要的意义。 　 蛋白质是复杂的含氮有机化合物，所含的主要化学元素为C、H、O、N，在某些蛋白质中还含有微量的P、Cu、Fe、I等元素，但含氮则是蛋白质区别其他有机化合物的主要标志。;;蛋白质含量测定最常用的方法;凯氏定氮法：常量法、微量法及经改进后的凯氏定氮法;学习重点与难点　;(1) ?原理 样品与浓硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，其中碳和氢被氧化为二氧化碳和水逸出，而样品中的有机氮转化为氨与硫酸结合成硫酸铵。然后加碱蒸馏，使氨蒸出，用硼酸吸收后再以标准盐酸或硫酸溶液滴定。根据标准酸消耗量可计算出蛋白质的含量。;消化反应方程式如下： 2NH2(CH)2COOH ＋ 13H2SO4 ＝ (NH4)2SO4 ＋ 6CO2 ＋ 12SO2 ＋ 16H2O 浓硫酸具有脱水性，使有机物脱水后被炭化为碳、氢、氮。浓硫酸又具有氧化性,将有机物炭化后的碳化为二氧化碳，硫酸则被还原成二氧化硫 2H2SO4 ＋C ＝2SO2＋ 2H2O ＋CO2二氧化硫使氮还原为氨，本身则被氧化为三氧化硫，氨随之与硫酸作用生成硫酸铵留在酸性溶液中。  H2SO4＋2NH3 ＝ (NH4)2SO4; 在消化完全的样品溶液中加入浓氢氧化钠使呈碱性，加热蒸馏，即可释放出氨气，反应方程式如下：;; 样品消化步骤同常量法。将消化完全的消化液冷却后，完全转入100容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀。 ;改进后的水化装置;②??? 蒸馏; ：取下接受瓶，以0.01mol/L盐酸标准溶液滴定至微红色为终点。;样品的分解条件;硫酸钾的作用;硫酸铜的作用;（1）所用试剂应用无氨蒸馏水配制。加指示剂数滴及硫酸数毫升， 以保持水呈酸性。 （2）若样品含脂肪或糖较多时，易发生的大量泡沫，应加入少量辛醇或液体石蜡，或硅消泡剂，防止其溢出瓶外，并注意适当??制热源强度。 （3）若样品消化液不易澄清透明，可加入300g/L2~3ml过氧化氢后再加热。 ;（5）硫酸铜起到催化作用，加速氧化分解。硫酸铜也是蒸馏时样品液碱化的指示剂，若所加碱量不足，分解液呈蓝色不生成氢氧化铜沉淀，需再增加氢氧化钠用量。 （6）若取样量较大，如干试样超过5g，可按每克试样5ml的比例增加硫酸用量。 （7）消化时间一般约4小时左右即可，消化时间过长会引起氨的损失。一般消化至透明后继续30分钟即可.;（8）蒸馏完毕，先将蒸馏出口离开液面，继续蒸馏1min，将附着在尖端的吸收液完全洗入吸收瓶内，再将吸收瓶移开，最后关闭电源，绝不能先关闭电源，否则吸收液将发生倒吸。 （9）硼酸吸收液的温度不应超过40°C，否则氨吸收减弱，造成损失，可置于冷水浴中。 （10）混合指示剂在碱性溶液中呈兰绿色，在中性溶液中呈灰色，在酸性溶液中呈红色。