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细胞培养知识? 生物技术资料　　加入时间：2007-10-4 19:44:32　　 　　点击：10511 冷冻管应如何解冻？?取出冷冻管后，?须立即放入37?°C?水槽中快速解冻，?轻摇冷冻管使其在1?分钟内全部融化，?并注意水面不可超过冷冻管盖沿，?否则易发生污染情形。另冷冻管由液氮桶中取出解冻时，?必须注意安全，?预防冷冻管之爆裂。?2?细胞冷冻管解冻培养时，?是否应马上去除DMSO？?除少数特别注明对DMSO?敏感之细胞外，?绝大部分细胞株（包括悬浮性细胞），?在解冻之后，?应直接放入含有10-15ml新鲜培养基之培养角瓶中，?待隔天再置换新鲜培养基以去除DMSO?即可，?如此可避免大部分解冻后细胞无法生长或贴附之问题。?3?可否使用与原先培养条件不同之培养基？?不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基，?若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基，?细胞大都无法立即适应，?造成细胞无法存活。?4?可否使用与原先培养条件不同之血清种类？?不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源，?所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清，?在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同，血清使用错误常会造成细胞无法存活。?5?何谓FBS,?FCS,?CS,?HS???FBS?(fetal?bovine?serum)?和FCS?(fetal?calf?serum)?是相同的意思，?两者都是指胎牛血清，?FCS?乃错误的使用字眼，?请不要再使用。CS?(calf?serum)?则是指小牛血清。HS?(horseserum)?则是指马血清。?6?培养细胞时应使用5?%?或10%?CO2？或根本没有影响？?一般培养基中大都使用HCO3-/CO32-/H+?作为pH?的缓冲系统，?而培养基中NaHCO3?的含量将决定细胞培养时应使用的CO2?浓度。当培养基中NaHCO3?含量为每公升3.7?g?时，细胞培养时应使用10?%?CO2；当培养基中NaHCO3?为每公升1.5?g?时，?则应使用5?%?CO2?培养细胞。7?何时须更换培养基？?视细胞生长密度而定，?或遵照细胞株基本数据上之更换时间，按时更换培养基即可。?8?培养基中是否须添加抗生素？?除于特殊筛选系统中外，??一般正常培养状态下，?培养基中不应添加任何抗生素。?9?附着性细胞继代时所使用之trypsin-EDTA?浓度？应如何处理？?一般使用之trypsin-EDTA?浓度为0.05%?trypsin-0.53mMEDTA.4?Na。第一次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中，?保存于-20?°C，避免反复冷冻解冻造成trypsin?之活性降低，?并可减少污染之机会。?10?悬浮性细胞应如何继代处理？?一般仅需持续加入新鲜培养基于原培养角瓶中，?稀释细胞浓度即可，?若培养液太多时，?可将培养角瓶口端稍微抬高，?直到无法容纳为止。分瓶时取出一部份含细胞之培养液至另一新的培养角瓶，?加入新鲜培养基稀释至适当浓度，?重复前述步骤即可。?11?欲将一般动物细胞离心下来，其离心速率应为多少转速？欲回收动物细胞，?其离心速率一般为300xg?(约1,000rpm)，5?-?10?分钟，?过高之转速，?将造成细胞死亡。?12?细胞之接种密度为何？?依照细胞株基本数据上之接种密度或稀释分盘之比例接种即可。细胞数太少或稀释的太多亦是造成细胞无法生长之一重要原因。?13?细胞冷冻培养基之成份为何？?动物细胞冷冻保存时最常使用的冷冻培养基是含5?-?10?%DMSO?(dimethyl?sulfoxide)?和90?-?95?%?原来细胞生长用之新鲜培养基均匀混合之。注意：由于DMSO?稀释时会放出大量热能，?故不可将DMSO?直接加入细胞液中，?必须使用前先行配制完成。?14?DMSO?之等级和无菌过滤之方式为何？?冷冻保存使用之DMSO?等级，?必须为Tissue?culture?grade之DMSO?(如Sigma?D2650)，?其本身即为无菌状况，?第一次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中，?保存于4°C，?避免反复冷冻解冻造成DMSO?之裂解而释出有害物质，?并可减少污染之机会。若要过滤DMSO，?则须使用耐DMSO?之Nylon?材质滤膜。?15?冷冻保存细胞之方法？?冷冻保存方法一:?冷冻管置于4?°C?30~60?分钟→?(-20?°C30?分钟*)?→?-80?°C?16~18?小时(或隔夜)?→?液氮槽vaporphase?长期储存。?冷冻保存方法二:?冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3?°C?至-80?°C?以下，?再放入液氮槽vapor?ph