基因探针.探讨.docVIP

HYPERLINK /view/3851939.htm列，它可以包括整个基因，也可以仅仅是/基因的一部分；可以是DNA本身，也可以是由之转录而来的RNA。 1简介HYPERLINK /view/212171.htm?fr=wordsearch#编辑 HYPERLINK /view/8563.htm基因探针，即HYPERLINK /view/28220.htm核酸探针，是一段带有检测标记，且HYPERLINK /view/662318.htm顺序已知的，与目的HYPERLINK /view/8563.htm基因互补的核酸序列(DNA或RNA)。HYPERLINK /view/8563.htm基因探针通过分子HYPERLINK /view/107223.htm杂交与HYPERLINK /view/141922.htm目的基因结合，产生杂交信号，能从浩翰的HYPERLINK /view/152123.htm基因组中把目的基因显示出来。根据HYPERLINK /view/107223.htm杂交HYPERLINK /view/437790.htm原理，作为探针的HYPERLINK /view/28220.htm核酸序列至少必须具备以下两个HYPERLINK /view/98838.htm条件：①应是单链，若为双链，必须先行变性处理。②应带有容易被检测的标记。它可以包括整个HYPERLINK /view/8563.htm基因，也可以仅仅是基 基因探针 因的一部分；可以是HYPERLINK /view/758.htmDNA本身，也可以是由之转录而来的HYPERLINK /view/759.htmRNA。 2简要概述HYPERLINK /view/212171.htm?fr=wordsearch#编辑 探针的来源 HYPERLINK /view/212975.htmDNA探针根据其来源有3种：一种来自HYPERLINK /view/152123.htm基因组中有关的基因本身，称为基因组探针（genomic probe）；另一种是从相应的HYPERLINK /view/1253409.htm基因转录获得了mRNA，再通过HYPERLINK /view/113742.htm逆转录得到的探针，称为cDNa 探针（cDNa probe）。与HYPERLINK /view/152123.htm基因组探针不同的是，cDNA探针不含有HYPERLINK /view/20817.htm内含子序列。此外，还可在体外人工合成碱基数不多的与HYPERLINK /view/8563.htm基因序列互补的DNA片段，称为寡核苷酸探针。 探针的制备 进行分子突变需要大量的探针拷贝，后者一般是通过HYPERLINK /view/534568.htm分子克隆（molecular cloning）获得的。克隆是指用HYPERLINK /view/256692.htm无性繁殖HYPERLINK /view/169819.htm方法获得同一个体、细胞或分子的大量复制品。当制备HYPERLINK /view/152123.htm基因组DNA探针进，应先制备HYPERLINK /view/61584.htm基因组文库，即把HYPERLINK /view/8563.htm基因组DNA打断，或用HYPERLINK /view/897994.htm限制性酶作不完全水解，得到许多大小不等的随机片段，将这些片段HYPERLINK /view/3853624.htm体外重组到运载体（HYPERLINK /view/43444.htm噬菌体、HYPERLINK /view/20005.htm质粒等）中去，再将后者转染适当的HYPERLINK /view/1495623.htm宿主细胞如大肠肝菌，这时在固体培养基上可以得到许多携带有不同DNA片段的克隆HYPERLINK /view/100479.htm噬菌斑，通过HYPERLINK /view/119339.htm原位杂交，从中可筛出含有HYPERLINK /view/141922.htm目的基因片段的克隆，然后通过细胞扩增，制备出大量的探针。 为了制备cDNA 探针，首先需HYPERLINK /view/329701.htm分离纯化相应mRNA，这从含有大量mRNA的组织、细胞中比较容易做到，如从造血细胞中制备α或β珠蛋白mRNA。有了mRNA作模板后，在HYPERLINK /view/113742.htm