第七章 分子发光分析法1.pptVIP

第七章 分子发光分析法;第一节 概述;;第二节 分子荧光分析法;;;;;;;; 图3.1分子荧光和磷光产生示意图 ;（3）延迟荧光 延迟荧光,其寿命与该物质的分子磷光相当。不论何种荧光都是从S1态的最低振动能级跃迁至S0态的各振动能级产生的.所以，同一物质在相同条件下观察到的各种荧光其波长完全相同（如图3.1 ③、④）只是发光途径和寿命不同.延迟荧光在激发光源熄灭后，可拖后一段时间，但和磷光又有本质区别，同一物质的磷光波长总比发射荧光的波长长。;二、分子荧光的性质;; （1）荧光激发光谱的测绘 激发光谱 测定激发光谱时，先固定第二单色器的波长，使测定的荧光波长保持不变，后改变第一单色器的波长由200nm～700nm扫描。以显示系统测出的相对荧光强度为纵坐标，以相应的激发光波长为横坐标作图，所绘出的曲线就是该荧光物质的激发光谱。 激发光谱反映了激发光波长与测定荧光强度之间的关系，为荧光分析选择最佳激发光提供依据。;（2）荧光激发光谱的特性 ①第二单色器不论怎样改变固定波长，同一荧光物质激发光谱的性质在其它条件一定时并不改变，变化的只是曲线高低，即测定的灵敏度发生变化。 ②同一物质的最大激发波长与最大吸收波长一致.这是因为物质吸收具有特定能量的光而激发，吸收强度高的波长正是激发作用强的波长。 实际上并不完全一致，因为激发光包含着光源以及单色器的特性，荧光分光光度计并不能保证在各波长处以完全相同的强度激发。;2、荧光发射光谱; （2）荧光光谱的特性 ①荧光光谱形状与激发波长无关 ②荧光光谱和吸收光谱有很好的镜像关系. 吸收光谱其形状决定于该分子S1态中各振动能级能量间隔的分布情况（称该分子的第一吸收带）。 荧光光谱的形状决定于S0态中各振动能级的能量间隔分布。由于分子的S0态和S1态中各振动能级的分布情况相似，因此，荧光光谱和吸收光谱的形状相似。 ;250 330 400 500 λ/nm;三、分子荧光的参数; 2、荧光量子产率φf 荧光量子产率φf反映了荧光物质发射荧光的能力，其值越大物质的荧光越强。;四、荧光强度的主要影响因素; 1、荧光强度与浓度 当测定体系和测定条件确定之后，K′、Фf 、I0以及摩尔吸光系数ε和液层厚度b均为常数设K=K′ФfI0εb，则： If = K C (3.5) (3.4) 、(3.5)式就是进行荧光分析的定量关系式。 ; 1、荧光强度与浓度; 一个发光体系中的发光分子数远远小于吸光分子数，为什么荧光分析法的灵敏度比吸光光度法的灵敏度还要高2～3个数量级呢？ 答：当荧光物质溶液的浓度C一定时，对吸光光度法： 吸光度A=εbC= -lgI/I0, 增加I0，I也增加，I/I0基本不变化，A基本恒定。而对荧光分析：If =K′Фf I0[1-(1-A)]= K′Фf I0A = K′Фf I0εbC 增加I0，虽然吸光度A=εbC基本恒定，但 相对荧光强度If会大幅度增加。所以，荧光分析法的灵敏度比吸光光度法的灵敏度还要高2～3个数量级。; 2、荧光与分子结构 ;Фf ; （2）刚性平面结构 强荧光物质的分子多数具有刚性平面结构，这样，可以减少分子自身的振动，并使分子与溶剂或其它溶质的相互作用减少，降低了碰撞去激的可能性或程度。; 有些物质的同分异构体有不同的荧光特性，如1，2－二苯乙烯，反式是平面构型的强荧光物质，顺式为非平面构型则不发荧光.如果非刚性配位体与金属离子配位后变为平面构型，就可能出现荧光或荧光加强.例如，8－羟基喹啉是弱荧光物质，在一定条件下与Al 3+、Mg 2+等离子配位后荧光显著增强，从而拓展了荧光分析的应用范围。; （3）取代基效应 取代基的种类和位置对荧光体的荧光光谱和强度有较强的影响。 给电子取代基加强荧光，如：-OH,-OR,-CN,-NH2,-NHR,-NR2,-OCH3等。 得电子取代基通常使荧光减弱，使磷光加强。例如：C=O、-COOH、-NO2、-SH等。 另外，芳环上取代上F、Cl、Br、I之后，使系间窜跃加强，其荧光强度随卤素原子量的增加而减弱，磷光相应增强，这种效应称为重原子效应。 ; （3）取代基效应 影响不明显的取代基有-NH3、-R、-SO3H等.-CN取代的芳烃通常都有荧光. 取代基的位置也有影响，对位、邻位取代增强荧光，间位取代抑制荧光。 双取代和多取代基的影响较难预测，取