环介导的等温扩增法概念.pptVIP

环介导的等温扩增法; 聚合酶链武反应技术(PCR)自1985年问世来，以其灵敏性、特异性和快速性在医学和分子生物学等领域得到广泛的应用，由此可见核酸扩增技术的重要性。 PCR方法依据其灵敏度高、特异性好，成为目前最精准的基因诊断方法。 然而常规PCR技术存在如下缺陷： (1)需要昂贵的PCR仪； (2)多因素影响扩增效果； (3)常引起非特异性扩增； (4)扩增反应时间长，一般需要几个小时，难以在基层推广应用等诸多的缺陷，急需更新的方法来替代。 ; 近年来随着分子生物学技术的发展，新的核酸扩增技术也不断涌现。根据是否需要温度循环也可分为两类：一类是非等温扩增体系，如聚合酶链式反应(PCR)、 连接酶链式反应(LCR)等。另一类是等温扩增体系，如赖解旋酶恒温基因扩增(HDA)、核酸依赖的扩增(NASBA)、滚环扩增(RCA)、环介导的等温扩增（LAMP）等系统，核酸恒温扩增??术的出现满足了上述要求。;1、赖解旋酶恒温基因扩增技术（HDA）;2、核酸依赖的扩增（NASBA) ;3、滚环DNA扩增;（2）指数RCA 指数RCA与线性RCA相似，它采用了第二种引物。该引物序列与环状DNA序列完全一致。在RCA循环中，此引物与第一次线性RCA产物结合并在聚合酶的作用 下延伸，其产物又作为 第一种探针的模板，这 样一来产物呈指数递增。 指数 RCA也可用于非环 状 DNA的扩增。;（3）基于锁式探针的滚环扩增;环介导等温扩增技术;1、LAMP反应过程包括哑铃状模板合成阶段、循环扩增阶段、伸长和再循环阶段; ;LAMP原理小动画;(1), Electrophoresis , ;2、Detection;3、Development;3、Loop-prime Loop primers hybridize to the stem-loops, except for the loops that are hybridized by the inner primers, and prime strand displacement DNA synthesis. RESULT:signal increase was detected at 14 min and 44 min with and without the loop primers, respectively;4、Optimized conditions for LAMP;5、Advantages;1、 the risk of contamination resulting from the high quantity of amplified DNA produced 2、LAMP methods are not feasible for diagnosis due to difficulties in accurately interpreting results with problems of sensitive visualization of amplified products ;7、Solutions ;2、HNB反应指示剂 ;Thanks for your attention！