新转座子(真核)资料.pptVIP

第二节? 细菌转座因子的转座机制、遗传效应和应用 一、转座因子的插入机制 转座因子不同于噬菌体和质粒，它们不是独立的复制子，不能独立存在。所有转座因子，包括插入序列、复合转座子、TnA及Mu噬菌体等的转座机制都很相似。 转座因子插入到一个新的部位的通常步骤是： 1.在靶DNA序列两侧各一条单链上造成一个切口，切口之间的距离决定了将来转座子两侧正向重复单位的长度。 2.转座子插入带有与突出单链末端的切口之间，二者共价连接起来， 3.由此形成的两段靶序列单链区由DNA聚合酶Ⅰ或其它类似的酶填充，再由连接酶将端口连接起来。交错末端的产生和填充解释了在插入部位产生靶DNA正向重复的原因。? ;二、转座模型 根据转座因子在转座过程中是否有共整合体及转座因子是否有复制而分为二种类型：复制型转座和非复制型转座；又可根据转座过程的不同，而分为剪-贴型转座、保守型转座和复制型转座等。 1.复制型转座(replicative transposition) (1)供体分子上的转座子首先被转座酶在其两端被交错切开，使转座子的两个DNA链都带有游离的3’末端OH基。 (2)转座酶在转座子两端进行切割的同时也对靶部位的两个链进行交错切割， (3)供体和靶链在切口处连接，转座子的每个DNA链的3’末端OH基与靶位点切割后产生的突出单链5’末端磷酸基团共价连接，从而产生一种交叉结构。 ;;2.非复制型转座(non replicative transposition) 根据在转座过程中有无交叉结构，而分为下面两种不同的类型。 (1)剪-贴型转座(cut-and-paste transposition) 这类转座又叫简单插入，是一种非复制型转座过程。 * 在该过程中转座酶识别转座因子的末端，在转座因子的末端进行双链切割， * 同时转座酶在受体的靶部位交错切割，然后转座子与靶部位的切口末端相连接。而且，在转座子过程中，转座因子并不与受体形成共整合体。这种类型的转座只需要转座酶。 * 很多插入序列(IS)和复合型转座子，如IS10、IS50、Tn5、Tn10等就是以这种途径进行转座的。?图12;(2)保守型转座(consertive transposition) 这种转座属于非复制型转座，但是在转座过程中有同复制型转座过程中类似的交叉结构的出现，但不形成共整合体。 转座子被插入到受体的靶位点DNA中，并且其两侧为由原来的单链切口所产生的重复序列。 供体DNA在原来转座子处留下一个大的缺口。 有些插入序列和转座子是以这种方式进行转座。 ? ;;(二)DNA重排 (缺失、扩增和倒位) 当转座因子插入某一基因后，一方面引起该基因的失活，另方面也引起插入部位邻近片段的不稳定而产生缺失，该现象首先在IS1中发现。以后在IS2、Tn3、Tn9等转座因子中都发现了这一现象。 缺失发生的原因推测是首先转座子以相同方向转座到邻近位置上，在两个正向重复转座因子之间发生同源重组，就导致宿主染色体DNA缺失。 如果转座因子以相反方向转座到邻近位置上，然后发生重组，则引起染色体DNA倒位 ( 见图14)。由于转座因子的存在而促使发生倒位的现象在Mu、IS1等转座因子中都有报道 同样，由于转座子之间的同源重组，可使两个不同的DNA片段连接在一起，从而引起DNA的扩增。;由于转座作用，使一些原来在染色体上相距甚远的基因组合到一起，构建成一个操纵子或表达单元，也可能产生一些具有新的生物学功能的基因和新的蛋白质分子。 ?(三)极性效应 * 与转座因子有关的另一个特殊现象是它们的插入极性效应，即当转座因子插入到一个操纵子的前端基因时，不仅能破坏被插入的基因，而且也能大大降低位于远离启动子一端的基因的表达。 * 现已发现绝大多数转座因子都有极性效应，而且正、反向插入时都有这种现象。研究发现，在IS的所有可阅读框内 (IS1除外)，包含有依赖于Rho的转录终止信号和终止密码子，这是造成极性突变的根本原因。 ;四、转座子的应用---转座子诱变 用于诱变的转座子一般都是复合型转座子，如：Tn5、Tn9、Tn10等。其中用的较多的是Tn5。Tn5具有转座频率高，对目标序列特异性要求低，且转座不需与细菌的基因组存在同源性等优点，因而被广泛用于许多革兰氏阴性菌的转座子诱变中。利用转座子可进行随机诱变和定位诱变。 ; 第三节 反转录病毒 一、反转录病毒的生活周期 * 反转录病毒是一类单链RNA病毒，它们所含有的基因组RNA是在反转录酶的作用下，经过双链DNA中间体，而后再行复制的。 * 病毒的生活周期中有一个和转座类似的过程，使双链DNA插入到宿主基因组，并使DNA靶位点产生短的正向重复序列。;二、反转录病毒的基因组和反转录中双链DNA的