筛选标记和目的基因.pptx

筛选标记与目的基因;筛选标记基因是一种已知功能或已知序列的基因，能够起着特异性标记的作用。 在基因工程意义上来说，它是重组DNA载体的重要标记，通常用来检验转化成功与否 筛选标记基因在遗传转化中担负着区分转化体和非转化体的重要作用。 合适的筛选标记基因及其相应的筛选剂是转基因成功的关键。;1.新霉素磷酸转移酶 II(NPT II)(npt II) nptⅡ基因最初是从大肠杆菌转座子 Tn5 中分离得到的， 即氨基糖苷磷酸转移酶 Ⅱ 基因， 它编码的氨基糖苷磷酸转移酶使抗生素被磷酸化而失活。因此 nptⅡ基因作为筛选标记基因可以使转化细胞对抗生素如卡那霉素、 G418、 巴龙霉素、 新霉素等产生抗性， 进而达到筛选的效果。目前， 该基因仍是植物基因工程中运用很广泛的选择标记基因。 2.潮霉素磷酸转移酶(HPT)(hpt) 从大肠杆菌中分离出来的 hpt 基因可以编码 HPT， 使其具有潮霉素 B的抗性。hpt 基因被证明是单子叶植物较为理想的筛选基因，因其选择效率高、 基因型差异小、 对转化细胞不产生或很少产生毒害作用、 再生的转基因植株育性较好等优点在水稻、玉米和小麦等作物上得到了广泛应用。目前， 大多数转基因水稻的有关研究中， 均以 HPT 作为抗性选择标记。;3.草丁膦 N －乙酰转移酶(PAT)(bar) 编码 PAT 的 bar基因最初是从吸水链霉菌中分离出来的。PAT 能使草丁膦的自由氨基乙酰化， 从而使草丁膦对植物无毒害作用。 这种筛选体系具有快速简便、 高效， 细胞产生的假转化体少， 并且使植物获得优良的抗除草剂农艺性状的优点。它是目前用得最多的选择标记基因之一。 4. α- 微管蛋白基因 从牛筋草中分离得到的 α － 微管蛋白基因突变体对二硝基苯胺类除草剂(TFL)具有抗性。目前， 已经作为筛选标记基因应用于单子叶植物和双子叶植物遗传转化研究工作中。;5.磷酸甘露糖异构酶(PMI)(manA) 编码 PMI 的 manA基因最初是从大肠杆菌中分离提取出来的， 目前在酵母、动物及人体中都已分离得到编码该蛋白的基因。然而， 除肉桂和一些豆类外， 自然界的植物中大都没有编码 PMI 的基因， 因此以甘露糖为筛选剂的筛选体系在绝大多数植物的遗传转化中??可以应用。并且被证明对环境和人体健康都十分安全。但是容易受到培养基或外植体内其他糖类水平等生理因素的干扰，因此该筛选体系的完善还有待进一步的研究。 ;6.木糖异构酶(xylA) xylA 基因是由赤褐色链球菌和嗜热厌氧杆菌中分离出来的。木糖是半纤维素的主要组成部分， 是生物体内含量仅次于葡萄糖的糖类。同甘露糖一样， 木糖也是许多植物细胞不能代谢利用的糖类， 例如烟草、马铃薯和番茄不能用 D- 木糖作为唯一碳源。然而木糖异构酶(D- sylose ketol- isomerse)可以催化木糖成为 D- 木酮糖， D-木酮糖可作为碳源。这种筛选方法比 nptII 基因的筛选效率高 10 倍左右， 并且发芽更快。研究证明这种酶是生物安全的并且在食品工业中得到普遍应用。 ;7.拟南芥 ATP 结合域(ABC)转运蛋白 ABC 蛋白是植物中普遍存在的蛋白质。在 ABC 蛋白质家族中它们有 30%～40%的结构是相似的。拟南芥 ABC 转运蛋白是依据它们结构域的同源性来分类的， 但是它们的功能还不是很清楚。植物基因 Atwbc19(2 178 bp)编码一种特殊的拟南芥 ABC 转运蛋白， 这种蛋白可使转基因植株具有卡那霉素的抗性。但是这种抗性机制与转基因烟草用的 CaMV 35S启动子启动细菌抗药基因的表达机制是不同的。由于 ABC转运蛋白是植物内源蛋白， 所以在同样的抗性基因遗传转化工作中 Atwbc19 作为筛选标记可以替代现在应用广泛的细菌标记基因。因此这种标记基因可能对于农业转基因研究来说是具有应用价值的。 ;8.色氨酸合酶 beta1(TSB1) 色氨酸(Trp)是一种存在于植物中的必需氨基酸， 它不能在动物中合成。通常状态下植物并不合成 Trp， 只有处于伤害环境等胁迫条件下才诱导合成 Trp。 在植物中，AtTSB1 基因的主要作用是将吲哚和丝氨酸转变成为 Trp。目前， Hsiao 等研究发现 AtTSB1 基因在植物转基因中可以作为一种新颖的非抗生素筛选标记， 对 5- 甲基色氨酸(5MT)或重金属的选择既简便又快捷。在含有 75μM 5MT 或者300 μM CdCl 2 的 MS 培养基上筛选转化植株效果很明显。通过以上研究结果得出结论， AtTSB1 转基因植物中积累Trp 可以限制 Cd 2 + 和其他重金属的增加， 或者抑制金属转运物的活动。因此， 重要的禾本科作物应用 AtTS