无缝克隆.docVIP

致力于提供生命科学创新产品！ 2012 分子生物学创新产品 GBI无缝克隆技术 GBI Direct PCR技术 高效转染试剂 高端生物技术服务 上海诺晶生物科技有限公司 无缝克隆试剂盒 ---全新重组技术将目标DNA片段精准插入载体！ ---突破传统，无需内切酶和连接酶！ ---省钱省时，分子实验室的必备！ GBI无缝克隆和组装技术是一种新的、快速、简洁的克隆方法。传统的PCR 产物克隆方法主要有两种：一种是PCR引物设计时引入载体上的酶切位点，PCR 产经双酶切后定向克隆到目的载体上；另一种是TA载体连接。这两种方法费时费力，过程繁冗。无缝克隆和组装技术旨在克服上述缺陷，它可以在质粒的任何位点进行一个或多个目标DNA 的片段的插入，而不需要任何限制性内切酶和连接酶。它可以为您解决克隆，片段组装，突变方面的技术困扰，提高您的工作效率，让您的工作变得轻松高效。 技术特点 位点选择灵活：载体任意位置基因克隆 快速简便：30 分钟完成载体构建 精确：不需要增加任何额外的程序 克隆效率高：高达90%阳性克隆 应用： 片段克隆，片断组装，突变构建 基因表达，沉默，小RNA等功能研究 蛋白质突变研究 应用合成生物学 代谢工程，菌株改造 无缝克隆技术原理 GBI无缝克隆技术只要插入的DNA片段末端与载体末端具有15-20个同源碱基序列就可以在载体的任意位点完成克隆重组。这种无缝克隆技术可灵活地将多个DNA片段组合成具有更多功能的DNA分子，可广泛应用于功能基因组学，蛋白功能研究，合成生物学，基因组改造等领域。 GBclonart无缝克隆操作过程： 1. 采用酶切或PCR扩增方法将载体线性化。 2. 使用设计好的引物进行目的DNA片段的PCR扩增（引物设计见说明书）。 3. 将目的DNA片段和线性化载体以摩尔比2:1加到试管中进行重组反应： a. GBclonart反应液 15 μl b. 线性化载体 x μl c. PCR片段 x μl d. H2O x μl ———— 总体积 20 μl 4. 混匀后在50℃孵育30分种，然后转移到冰上。 5. 使用5 μl反应液转化到感应态细菌中。 使用基因定点突变试剂盒，只需要在突变位点如下图增加两条正反的引物，分别和线性化载体两端的对应引物配对，进行两个PCR片段的扩增，然后使用GBI的突变试剂盒将2个PCR产物和线性化载体在同一反应体系中进行进行重组反应，即可将点突变构建到目的片段上。该试剂盒广泛应用在基因功能和蛋白功能研究领域. 基因定点突变试剂盒技术原理 利用无缝组装试剂盒，可以将多个PCR片段进行连接，并构建到目标载体上，形成长片段的DNA片段。该试剂盒在合成生物学上有广泛而重要的作用。 无缝组装试剂盒原理 GBclonart引物设计方法 GBclonart基因克隆的引物设计及目的DNA片段的扩增，与常规PCR法是相同的。唯一的差异在于载体末端和引物末端应具有15-20个同源碱基，由此得到的PCR产物两端便分别带上了15-20个与载体序列同源性的碱基。 举例如下： 订购信息 货号描述规格价格（元）GB2001-24GBclonart无缝克隆试剂盒24个反应1600GB2001-48GBclonart无缝克隆试剂盒48个反应3000GB2002-24GBclonart无缝组装试剂盒24个反应3200GB2002-48GBclonart无缝组装试剂盒48个反应6000GB3001-24GB 定点突变试剂盒24个反应3200GB3001-48GB 定点突变试剂盒48个反应6000 一步法PCR检测试剂盒 ---无需样本处理和核酸提取,操作快速简便！ ---一步加样，PCR易如反掌！ ---省钱省时，分子实验室的必备！ Pikoreal 定量PCR Arktic梯度PCR Medusa 96通道 半自动移液器 GB-Direct PCR 是一种世界领先的核酸释放和扩增试剂盒，包含核酸萃取液和相应的PCR缓冲液 （含PCR酶）。各类生物样品经过GB-Direct 核酸萃取液处理后可直接用于PCR 反应，无需提取其DNA。GB-Direct 萃取液仅需10 min 左右，即可以有效地释放生物样品中的核酸。而且，经优化后的PCR 预混液可有效地消除一些抑制剂（如血红蛋白等）对PCR 反应的干扰，使得PCR反应高效进行。GB-Direct PCR 适用范围广泛，包含一系列生物样品，如血液，动物、植物、真菌、 酵母、细菌和病毒等，简化