成像系统实验课.ppt

化学发光、荧光、可见光成像分析系统原理及操作;一、结构配置;CCD的重要参数;镜头的参数;3、暗箱;应用范围;（Ⅰ） 可见光;可见光;（Ⅱ）荧光;荧光;（Ⅲ）化学发光;化学发光;;Western Blotting基本原理 　及　实　验　步　骤;印迹法（blotting）是指将样品转移到固相载体上，而后利用相应的探测手段来检测样品的一种方法 对DNA的印迹分析称为Southern印迹法 对RNA的印迹分析称为Northern印迹法 单向电泳后的蛋白质分子的印迹分析称为Western印迹法 双向电泳后蛋白质分子的印迹分析称为Eastern印迹法 ;Western Blot基本原理;Western Blot应用;仪器与设备;Western Blot 流程;蛋白样品的制备;凝胶成分;设计　根据需要检测的蛋白分子量大小选择配制合适浓度的分离胶，再根据需要上样的数量选择适当齿数的梳子 制胶 先铺分离胶，干凝后，倒去上面的水（或甲醇），用滤纸吸干。再铺浓缩胶，不要产生气泡，插梳子，待胶干后备用 上样　拔去梳子，所有上样孔均加样。没有样本时，用上样缓冲液代替 电泳 一般100-150V，溴酚蓝快要跑出胶时结束 ;参照体系;转膜方式;封闭——除去非特异的结合位点;抗体孵育;显色;化学发光显色法（胶片）;成像系统操作步骤;点击“Start preview”，待显示样品位置后，打开FUSION机箱外门并调整样品位置使其处于成像界面中央。根据需要调整光圈和焦距使图像效果达到最佳。名片或其他印有字体的小纸片可用来获取最佳焦距 选择化学发光文件夹；选择最佳光圈；调整曝光时间为自动曝光或者根据样品情况选择更合适的曝光时间；点击“Start Exposure”； 曝光结束后保存图像； 使用BIO-1D软件或IMAGE-J等软件对图像进行光密度分析。 ;注意;1- Acquisition Go to the Image capture menu 2- Open Open an image 3- Save Save an image 4- Print Print on the default printer (if connected) 5- Crop Select the image area to be saved 6- Profile out Save and retrieve the user setting 7- Help Open the Help file on a specific function;The Fusion-Capt software offers three image acquisition modes: Fluorescence mode for full control of gel image capture ; Chemiluminescence mode for a one click approach to image capture of low light sample; Video mode for repetitive image acquisition with or without image accumulation. In addition to that, the Fusion-Capt software has analysis and parameters modes. Each mode is gathered in a specific folder:; Modify the display of the image (autoscale, inverse, saturation, gamma and greyscale selection to enhance the image display);1- Position focus Start preview: view a real time preview of your image capture. Stop: end the real time preview. Aperture: select the appropriate aperture to receive more or less light Focus: adjust the focal point Autofocus: automatically adjust the focal point Focus gauge: the focus gauge is an aid in focusing. 2- Image cap