第5章核酸研究资料.ppt

核酸的发现： 1869年，瑞士青年科学家 F.Miescher; 核酸的种类;核糖核酸（ribonucleic acid-RNA）:转移RNA(transfer RNA-tRNA) 、信使RNA(messenger RNA-mRNA)、核糖体RNA（ribosomal RNA-rRNA） 功能 ：三者共同参与遗传信息的表达。;第一节 核苷酸的结构 ;核酸的分子组成;（1）碱基： 嘌呤碱嘧啶碱;（2）戊糖;糖与碱基之间的C-N糖苷键，称为N-糖苷键。 嘌呤碱： C1’-N9 嘧啶碱： C1’-N1 ;（4） 核苷酸;5）核苷酸的连接方式：磷酸二酯键143;DNA或RNA的差别体现在核苷酸的碱基上，所以多聚核苷酸链结构也可表示为：;一、DNA的碱基组成（Chargaff定则）：;二、DNA的二级结构;JD Watson;一）DNA双螺旋结构的要点;（2）基团的空间位置。嘌呤和嘧啶碱位于螺旋的内侧，磷酸和脱氧核糖基位于螺旋外侧。碱基环平面与螺旋轴垂直，糖基环平面与纵轴平行。;（3）螺旋参数：螺旋横截面的直径约为2 nm，每条链相邻两个碱基平面之间的距离为0.34 nm，每10个核苷酸形成一个螺旋，其螺矩（即螺旋旋转一圈）高度为3.4 nm。;DNA双螺旋结构的要点;（5）螺旋表面：;二）DNA双螺旋的稳定性;三）DNA双螺旋的结构类型;四）DNA的高级结构：超螺旋;; ; 一类能识别双链DNA分子中特异核苷酸序列的DNA内切酶。 该酶能识别特定外来的核酸序列而将切断；而又能对自身DNA进行修饰保护，构成自我保护的限制－修饰体系。 修饰保护：对自身DNA的酶作用位点进行修饰保护（主要甲基化）。;按限制酶的组成、与修饰酶活性关系，切断核酸的情况不同，限制性核酸内切酶分为三类，在重组DNA技术提到酶主要指Ⅱ类酶而言。 绝大多数Ⅱ类限制酶识别长度为4至6个核苷酸的回文对称序列。 切割后产生平末端或粘性末端。;限制性核酸内切酶的命名;酶;;第四节 RNA的结构特征（164）;一、mRNA (信使RNA);mRNA一级结构的特点;（一）原核生物mRNA含SD序列 ;;（二）真核生物mRNA5端的帽子结构;3’-末端尾巴;真核生物是断裂基因;二 tRNA;tRNA分子具有以下特点;(1)氨基酸臂3’-末端的最后3个核苷酸残基都是CCA，氨基酸可与其成酯，在蛋白质合成中起携带氨基酸的作用。(2)反密码环与氨基酸接受区相对，其中环正中的3个核苷酸残基称为反密码子，起着识别mRNA上密码子的作用。 次黄嘌呤核苷酸常出现在反密码子中（可和A,C,U配对）。;（3)二氢尿嘧啶区 该区含有二氢尿嘧啶。 (4) T?C区 由7个核苷酸组成。除个别例外，几乎所有tRNA在此环中都含有T?C 。 (5)额外环 不同的tRNA该区变化较大。区别tRNA种类的依据。;2,tRNA的三级结构：倒L型;三、rRNA (核糖体RNA);;第五节 核酸的性质三、核酸的紫外吸收;定量测定;五．核酸的变性与复性;当DNA的加热到80-100℃时，双螺旋结构解体，两条链彼此分开，形成无规线团。 DNA变性后，系列性质也随之改变，如吸收值(260nm)升高（增色效应）,粘度降低等。;熔解温度Tm;（1）GC含量。G和C的含量高，Tm值高。 （2）DNA组成的均一性。样品均一，熔解在一个较窄的温度范围内。 （3）介质中的离子强度和pH值。DNA不要保存在纯水中，在1mol/L NaCl溶液中稳定。;核酸 G+C 組成分越高， Tm 越大;(2) 核酸的复性;DNA变性;DNA复性;(3) 核酸的杂交;核酸分子间的 hybridization;应用