大鼠脑缺血再灌注后IRE1通路XBP1、CHOP基因表达及参芎对其影响.pdfVIP

目 录 中文摘要………………………………………………………………3 英文摘要………………………………………………………………5 前 言………………………………………………………………8 第一部分 大鼠脑缺血再灌注损伤后内质网应激 IRE1 通路中 XBP1、 CHOP 基因表达及神经元凋亡机制的研究……………11 第一章 材料与方法……………………………………………11 第二章 结果……………………………………………………19 第三章 讨论……………………………………………………25 第四章 结论…………………………………………………29 第二部分 参芎对大鼠脑缺血再灌注损伤后内质网应激机制 XBP1、 CHOP 的影响及神经保护作用…………………………30 第一章 材料与方法……………………………………………30 第二章 结果………………………………………………………33 第三章 讨论………………………………………………………40 第四章 结论……………………………………………………42 参考文献………………………………………………………………43 附录……………………………………………………………………49 综述…………………………………………………………………50 攻读硕士学位期间发表的论文及参与的科研课题…………………59 致谢…………………………………………………………………60 2 大鼠脑缺血再灌注后 IRE1 通路 XBP1、CHOP 基因表达及参芎 对其影响 摘 要 背景与目的 脑缺血再灌注损伤引起的细胞死亡包括凋亡和死亡两种，迟发性神经细胞损 伤多以凋亡的形式出现。近来研究表明缺血性脑损伤时细胞的凋亡不仅存在线粒 体途径及死亡受体途径还存在内质网途径。在内质网应激反应中，IRE1 介导的 UPR 信号通路很重要，它不仅诱导的 XBP1 的表达，还通过诱导凋亡因子如 CHOP 的表达启动细胞凋亡。XBP1 是内质网应激的标志物。目前在脑缺血再灌注模型 中有关 IRE1 介导的 UPR 信号通路的研究较少见。本研究第一部分通过检测局灶 性脑缺血后 XBP1、CHOP 基因在大鼠脑内的表达变化，以探讨它们在脑缺血损伤 中的作用及其与细胞凋亡的关系，从而为了解脑缺血后细胞凋亡的分子调控机制 提供实验基础；第二部分应用参芎对大鼠 MCAO 模型进行干预，研究参芎对 ERS 后 IRE1 通路 XBP1、CHOP 基因表达的影响及神经保护机制，从而为临床治疗脑缺 血提供理论基础和治疗思路。 方法 实验第一部分将 10-12 周龄健康雄性 144 只雄性 SD 大鼠随机分为两组：假 手术组、手术组；实验第二部分随机使用健康雄性 SD 大鼠 72 只分为参芎组。采 用线栓法制作大脑中动脉缺血再灌注模型，用 Longa’s 的 5 级标准评分法评价 神经功能缺损。再灌注后 6h、12h、24h、72h 处死动物，TTC 染色测定脑梗死体 积，免疫组化学及 RT-PCR 法分别检测脑缺血区 XBP1、CHOP 蛋白和 mRNA 表达变 化；末端标记法原位检测神经细胞凋亡。 结果 1.大鼠 MCAO 模型脑梗死体积及神经细胞凋亡随再灌注时间增加而增加，均 在 24h 达到高峰。 2.XBP1、CHOP 蛋白及 mRNA 水平在再灌注后均有升高,其中 XBP1、C