第四章DNA的复制6资料.ppt

第四章 DNA的复制 第一节 DNA复制概述 第二节 原核生物DNA的复制 第三节 真核生物DNA的复制 ;DNA复制(replication) 是指遗传物质的传代，以母链DNA为模板合成子链DNA的过程。;生物体内遗传信息的传递;第一节 DNA复制概述;一、半保留复制;半保留复制机理证明;二、DNA复制的一些概念; 原核生物：一个复制起始位点。E.coli：ori C，全长245bp，该序列在所有细菌复制起始位点中都是保守的。 真核生物 ：DNA的复制是从许多起始点同时开始的，所以每个DNA分子上有许多个复制子。 ;◎复制起点和终点 无论是原核细胞还是真核细胞，复制都是从DNA分子上的特定位点开始的,这一位点称为复制起始点(origin)。而终止复制的位点称为复制终点(termini)。;◎复制叉 (replication fork):复制时双链打开，分开成两股，新链沿着张开的模板生成，复制中形成的这种Y字形的结构称为复制叉。; ◎复制方向 复制可以单向﹑双向进行，取决于在复制起始点有一个还是两个复制叉。 通过放射自显影实验可以判断DNA复制是双向还是单向进行的。 从复制叉走势上看，有三种复制方式适合半保留复制机：相向复制 单向复制 双向复制;相向复制: 从两个起点开始的，形成两个复制叉，各以一个单一方向复制出一条新链。;单向复制: 复制从一个起始点开始，以同一方向生长出两条链，形成一个复制叉。;双向复制: 从一个特定位点解链，沿着两个相反的方向各生长出两条链，形成一个复制泡，用电子显微镜可以观察到复制泡的存在。;◎复制方式 有三种 θ型复制 滚环复制 D环复制; θ 型复制 细菌常见的复制方式； 双链环状DNA的复制眼可以形成一种θ结构，复制的中间产物为θ 型结构，形状像希腊字母θ θ型复制可以是双向或单向，大多为等速的双向，少数为不等速的双向复制;;;dNTP;◎复制速度;表 细菌和真核生物复制的比较;三、DNA复制的酶体系;DNA聚合酶;◆ DNA聚合酶 (DNA polymerase) ;如 E. Coli DNA聚合酶;323个氨基酸;; 此酶MW为120KD，每个细胞内约有100个酶分子，但活性只有DNApolⅠ的5%。该酶的催化特性如下： 聚合作用:该酶催化DNA的聚合，对模板有特殊要求。最适模板是双链DNA而中间有空隙(gap)的单链DNA部份，且该单链空隙长不到100个核苷酸。对长的单链DNA模板区该酶的聚合活性很低。但用单链结合蛋白(SSBP)可以提高其聚合速率，可达原来的50-100倍。 该酶也具有3→5外切酶活性，但无5→3外切酶活性。 该酶对作用底物的选择性较强，一般只能将2-脱氧核苷酸掺入到DNA链中。 该酶不是复制的主要聚合酶，因此酶缺陷的大肠杆菌突变株DNA复制都正常。可能在DNA损伤修复中起到一定的作用。; DNA聚合酶Ⅲ（Pol Ⅲ） 它是由一个多亚基组成的蛋白质分子，其分子量＞600kDa整个酶分子形成一个不对称的二聚体，每个大肠杆菌细胞中只有1000个酶分子，催化dNTP参入DNA链的速率却是最快的，约为9000核苷酸/分/酶分子。这也证明DNA?polⅢ是DNA复制过程中主要发挥作用的酶。 ;（a）核心酶： （?, ?, ?） （b）β二聚体：保持全酶结合在DNA模板上 （c）γ复合物：帮助β二聚体结合在模板上 （d）τ二聚体：连接核心酶与γ复合物;大肠杆菌(E. Coli )DNA聚合酶性质的比较;◆ DNA连接酶; 解旋酶是一类解开氢键的酶，由ATP来供给能量。它常常依赖于单链的存在，并识别复制叉的单链结构。 目前，大肠杆菌中发现有两类解旋酶参与这个过程，一类称为解旋酶Ⅱ或解旋酶Ⅲ，与模板DNA结合沿5‘→3’方向运动;第二类称为Rep蛋白，和模板DNA结合沿3→5方向运动。 ;◆单链结合蛋白 (SSB); DNA在细胞内常以超螺旋状态存在，DNA拓扑异构酶催化同一DNA分子不同超螺旋状态之间的转变。DNA拓扑异构酶有两类，拓扑异构酶Ⅰ. 作用是暂时切断一条DNA链，形成酶-DNA共价中间物而使超螺旋DNA松弛化，再将切断的单链DNA连接起来，不需要任何辅助因子。拓扑异构酶Ⅱ(旋转酶(DNAgyrase) )，能将负超螺旋引入DNA分子，该酶能暂时性地切断和重新连接双链DNA，同时需要ATP水解为ADP以供能。?; DNA复制起始的关健步骤是前导链DNA的合成，前导链DNA聚合开始，随从链DNA的合