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细胞工程 第一篇细胞工程基础 第一章 绪论 教学目的与要求 1.了解细胞工程的概念与研究内容； 2.了解细胞工程的发展简史。 1.细胞工程(Cytotechnology；Cell Engineering)是指以生物细胞或组织为研究对象，按照人们的意愿进行工程学操作，从而改变生物性状，以获得生物产品，为人类生产和生活服务的科学。 Cell: 研究对象或水平（细胞、细胞核、染色体、受精卵、胚胎、组织或器官） Engineering: 借助工程学原理、技术、方法、手段对细胞进行改造； 规模化生产（新品种或产品） 2．细胞工程技术的应用 1.优质植物的快速培育与繁殖 2.动物胚胎工程快速繁殖优良或濒危的动物 3.利用动植物细胞培养生产活性产物药品 4.新型动植物品种的培育 5.在医学器官修复或移植中的应用 6.制备转基因动植物的生物反应器工程 7.珍稀动植物资源的保存与保护 8.在遗传学、发育生物学等领域的理论研究 9.能源与环境保护方面 第二章 细胞工程实验室组成及无菌操作技术 教学目的与要求 1.了解细胞工程实验室的组成及基本设备； 2.了解实验室空间和物品的灭菌和消毒的常用方法； 3.了解培养基的成分及种类。（重点） 1．实验室的组成 （一）动物细胞工程实验室： 无菌操作室、培养室、细胞学鉴定室、储藏室、制备室、清洗灭菌室 （二）植物细胞工程实验室： 灭菌室、制备室、无菌操作室、光照培养室、温室（炼苗大棚） 2．基本设备 3．常用灭菌和消毒的方法 （一）物理灭菌方法 1.湿热灭菌：121-126℃，15-30min，主要用于培养基、玻璃器皿、金属器械、衣服等的灭菌。 2.干热灭菌：170℃，90-120min，主要用于玻璃器皿的灭菌。 3.过滤除菌：主要用于高温条件下易变性的溶液及培养液的灭菌，微孔滤膜的孔径一般为0.45μm和0.22μm。 4.紫外线灭菌：260nm，主要用于超净工作台、接种室的灭菌。 5.灼烧灭菌：主要用于金属器械的灭菌 （二）化学消毒方法 1.熏蒸消毒：（2ml甲醛+1g高锰酸钾）/m3，熏蒸1-3天，主要用于消毒空气。 2.药剂喷雾消毒：常用75%酒精喷雾或擦拭台面、墙面、双手或植物材料表面。 （三）无菌操作技术 1.无菌室及超净工作台消毒 无菌操作室的消毒：定期使用甲醛和高锰酸钾熏蒸消毒，使用前用75%酒精喷雾，并用紫外线灭菌20-30min 超净工作台的消毒： 用湿布擦净台面→紫外线照射20-30min→正常送风30min→75%酒精擦拭台面→接种 2．植物材料无菌操作技术 1.材料的表面消毒（一般程序）自来水冲洗→70%酒精浸润10-30s→0.1%HgCl2浸泡5-10min→无菌水冲洗3-5次　　　　　2.切割、接种 4．培养基（medium）定义：含有一定营养成分，供离体培养的植物组织或细胞生长的基质。 种类：固体培养基营养分布均匀，生长整齐一致，但通气性差 液体培养基通气性较好，便于操作，但营养分布不均匀，生长发育不整齐。pH值：5.8-6.0 （一）成分 1.无机化合物 大量元素：N、P、K、Ca、Mg、S微量元素：Fe、Zn、Cu、Mn、 Co、 Mo、I 2.有机化合物 （1）糖类作为碳源和能源，同时也可维持一定的渗透压；常用2%-3%蔗糖，也可用葡萄糖、果糖、麦芽糖、半乳糖、甘露糖和乳糖等。 （2）维生素直接参与酶的形成以及蛋白质、脂肪的代谢；常用的有VB1(盐酸硫胺素)、VB6(盐酸吡哆醇)、VB3（烟酸）、VB7(生物素)、VB9(叶酸)、肌醇、VC(抗坏血酸)等。 （3）氨基酸 常用甘氨酸、半胱氨酸、丝氨酸、酪氨酸、精氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺等。 （4）其他有机附加物水解乳蛋白（LH）、水解酪蛋白（CH）、椰子汁（CM）、麦芽浸出物（ME）、酵母浸出物（YE）等 3.植物生长调节物质 （1）生长素类促进细胞分裂；诱导愈伤组织或器官的分化，促进侧芽增殖、抑制根的分化，常用于诱导不定芽的分化、苗的增殖。常用6-BA、KT、ZT、2ip等。 （2）细胞分裂素类促进细胞分裂；诱导愈伤组织或器官的分化，促进侧芽增殖、抑制根的分化，常用于诱导不定芽的分化、苗的增殖。常用6-BA、KT、ZT、 （3）赤霉素类常用赤霉酸(GA3)，可促进幼苗茎的伸长生长和胚状体发育成小植株。 （4）脱落酸（ABA）低水平的ABA有利于胚性愈伤组织的形成。 4.固化剂常用琼脂，一般用量为0.5～1.0％ （二）基本培养基的种类 1.MS培养基：无机盐和离子浓度较高，比例较合适，广泛用于植物的器官、细 胞和原生质体培养 2.B5培养基：含有较低的铵，更适合于木本植物的离体培养 3.White培养基：无机盐浓度较低，适于生