蛋白质(考研)资料.ppt

COOH;(1) 按R基的化学结构，20种氨基酸可分为脂肪族，芳香族，杂环族三类 脂肪族 中性氨基酸Gly Ala Val Leu Ileu;含羟基或硫氨基酸 Ser Thr Cys Met;酸性及其酰氨 Asp Asn Glu Gln;碱性Lys Arg 芳香族：Phe Tyr Trp 杂环族： His Pro 例如： Cys 在蛋白质中经常以胱氨酸存在;Met等是体内代谢中甲基的供体。Arg 在蛋白质代谢中是动物体内尿素形成中的中间物。 Tyr在代谢中产生的衍生物儿茶酚胺类是在神经系统中起重要作用; Trp 在植物和某些动物体内能转变为尼克酸（维生素PP）;(2) 按R 基的极性性质，20种氨基酸共分为四组： 非极性R基氨基酸 极性不带电荷R基氨基酸 带负电荷R基氨基酸 （酸性氨基酸） 带正电荷R基氨基酸（碱性氨基酸）;氨基酸 丙氨酸 缬氨酸 亮氨酸 异亮氨酸 苯丙氨酸 色氨酸 甲硫氨酸 脯氨酸;NH2—CO—CH2—CH2—;NH3?—CH2—CH2—CH2—CH2—;赖氨酸、苏氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、缬氨酸、色氨酸;三、氨基酸的理化性质;电离常数 Ka1,Ka1计算较麻烦，数值通过试验值。 ;等电点定义：某一氨基酸的净电荷等于零时的溶液pH值为该氨基酸的等电点 不同的氨基酸有不同的等电点 ;例如，赖氨酸的两性解离为：;氨基酸表观解离常数和等电点;等电点时的特点及应用： ① 溶解度下降。用途：可根据氨基酸的等电点来分离不同氨基酸，如味精生产时将pH值调到3.22，谷氨酸沉淀下来。 ② 据等电点判断氨基酸在水溶液中带什么电荷。例如，Asp溶于水，显酸性，带负电荷；Lys溶于水，显碱性，带正点荷。;;酰化试剂在人工合成肽时的应用：保护氨基。常见有Cbz-CI（苄氧酰氯）. Boc-CI（叔丁氧甲酰氯）. Tosyl-CI（对甲苯磺酰氯）. DNS-CI（丹磺酰氯）等. DNS-CI 被用于肽链NH2末端氨基酸的标记和微量氨基酸的定量测定，和氨基酸结合后显黄绿色荧光。 ;（3）烃基化反应 (A) Sanger反应 氨基酸与二硝基氟苯（DNFB）反应，生成二硝基苯代氨基酸（DNP—氨基酸）;(B) Edman反应 苯异硫氰酸酯与氨基酸反应生成PTH—氨基酸;3.a-氨基和a-羧基共同参加的反应;4. 侧链R基参加的反应 P140-141 四、氨基酸的光学活性和光谱性质 1. 氨基酸光学活性与立体化学 L-构型和D-构型氨基酸各自都有光学活性，但蛋白质用碱水解和用一般有机化合合成的氨基酸无光学活性，因LD构型混合物；Thr，Ile是2对对映体；胱氨酸有一个内消旋。 2. 所有20种基本氨基酸在可见光区都无光吸收，在近紫外区三种芳香氨基酸具有紫外吸收，即：苯丙氨酸—257nm、酪氨酸—275nm、色氨酸—280nm A= abc ;（五）.氨基酸的分离方法 1. 分配层析 固定相，流动相;样品1;§1-2 肽(Peptide);3.在肽平面，两个C?和C?是反式结构。只有遇到Pro例外，它与任意氨基酸残基组成的肽平面是顺式结构稳定，因此，主肽链的肽平面在这儿形成折转。 4.在肽链中有多个Cys参与形成肽链，可能形成肽链中的二硫键或肽链之间的二硫键。;3.化学性质： ① 肽的化学性质与氨基酸一样，因为它有?-NH2和?-COOH； ② 肽的N端由于有 ?-NH2 ，所以也可与茚三酮反应呈紫色，用于定性和定量测定多肽或蛋白； ③ 肽和蛋白特有一个反应：双缩尿反应，而氨基酸没有此反应，因双缩尿反应必须有肽键存在（但含有NH3、乙二酰二胺等物质干扰）。见化学反应式：;由于有巯基，所以有氧化还原反应 GSH + GSH ? GS—SG + 2H+ +2e- 谷胱甘肽是生物体内重要的氧化还原物质，对细胞起到了保护作用。特别在红细胞中，维持血红蛋白运氧功能。;§1-3 蛋白质一级结构和测定;（二）N-末端和C-末端氨基酸残基的鉴定1. N-末端分析（1） 2,4-二硝基氟苯(DNFB)法：蛋白质的末端氨基与2,4-二硝基氟苯(DNFB)在弱碱性溶液中作用生成二硝基苯基蛋白质（DNP-蛋白质）。产物黄色，可经受酸性100℃高温。水解时，肽链断开，但DNP基并不脱落。DNP-氨基酸能溶于有机溶剂（如乙醚）中，这样可与其他氨基酸和ε-DNP赖氨酸分开。再经双向滤纸层