2.菌种选育理论和技术分析.ppt

第二章 工业微生物菌种选育;第一节 微生物分离;1.2 采样时要注意的问题; 富集的三种方案：;定向培养的富集方法;1.4 菌落的选出;例：醛肟水解酶的筛选 ;1.5 目的微生物富集方法的研究进展 ;第二节 自然选育;;第三节 诱变育种;;3.3 诱变剂; 实验室：15W，253.7nm，灯管与样品的距离30cm，剂量由时间（30秒、 60秒、 90秒、 120秒）或能量（格尔）决定。 死亡率控制在70~90%。 诱变后注意要避光培养（因为光复活现象）。 ; 3.3.2 化学诱变剂 烷化剂：如亚硝基胍（NTG）、硫酸二乙酯（DES）、乙烯亚胺（EI）、氮芥 作用机制：使核酸的氮原子上烷基，从而使配对错误。;;移码诱变剂：丫啶橙、丫啶黄 引起碱基丧失或增加 抗癌药物：丝裂霉素、争光霉素 抑制DNA复制 3.3.3 生物诱变剂 噬菌体，转座子 ;3.4 菌种诱变的方法;;诱变剂的使用： 剂量以诱变剂浓度和处理时间来表示;充分利用复合处理的协同效应;3.4.3 突变株的选择;;; 3.4.3.2 理性化筛选 初级代谢产物高产菌株的筛选 ①筛选营养缺陷型 若分别筛选Ｄ、Ｅ高产菌株，根据下列代谢途径，应： A B C D E A B C D ;②筛选细胞膜透性改变的突变株 筛选油酸缺陷型或甘油缺陷型 ;HD:高丝氨酸脱氢酶;黄色短杆菌F9-50的诱变谱系; ④利用回复突变筛选抗反馈突变株 先选对产物敏感的菌株，再诱变处理得到恢复突变株（改变酶的调节位点，不受产物的反馈抑制）。; 次级代谢产物高产菌株的筛选 ①筛选营养缺陷型 ②筛选负变株或零变株的回复突变株 ③筛选去磷酸盐调节突变株 磷酸盐对许多抗生素的生物合成有抑制作用 ;④筛选去除碳源分解代谢突变株 能被菌快速利用的碳源在被代谢后，对其他代谢途径的酶有抑制作用，例葡萄糖效应。 葡萄糖效应：培养基中同时含有葡萄糖和乳糖，微生物先利用葡萄糖、葡萄糖利用完后才利用乳糖，出现两次菌体生长旺盛时期，若加入乳糖酶诱导物，也不产生乳糖酶，而是在葡萄糖利用完后才产生。 方法：将菌在含有葡萄糖和以组氨酸为唯一氮源的培养基连续传代。 ⑤筛选氨基酸结构类似物抗性突变株 许多抗生素和氨基酸有共同的前体;⑥筛选二价金属离子抗性突变株 二价金属离子可与产物或其中间体结合，抑制产物合成 ⑦筛选前体或前体结构类似物抗性突变株 前体或前体结构类似物对菌体的生长和抗生素的生物合成有抑制作用 ⑧筛选自身所产抗生素抗性突变株 ;第四节 杂交育种;4.2.1 细菌杂交;4.2.2 酵母杂交育种技术; 一般而言，杂交育种运用了酵母的单双倍生活周期，将不同基因型和相对的交配型的单倍体细胞经诱导杂交而形成二倍体细胞，经筛选便可获得新的遗传性状。 ;第五节 原生质体技术;原生质体制备和再生的过程 ;第六节 分子育种;6.1.1 增加限速酶的基因拷贝数;例2. 头孢菌素C生物合成的限速酶;;6.1.2 增加正调节基因, 去除负调节基因; ;去除负调节基因使结构基因超量表达;6.1.3 增加抗性基因的拷贝数;例1. Davies J. 利用链霉菌质粒pIJ702 从卡那霉素产生菌克隆了6’-N-氨基糖苷乙酰转移酶AAC6’的基因(aacA),该基因产物在乙酰辅酶A的存在下,可将氨基糖苷类抗生素的氨基糖6’乙酰化。将aacA基因转入新霉素和卡那霉素的产生菌中, 结果显著???高了抗生素的产量.;卡那霉素6’-乙酰转移酶[AAC（6’）] 的作用;例2. 螺旋霉素抗性基因srmB 重组质粒 转化 S.ambofaciens（生二素链霉菌） 转化子 使螺旋霉素产量提高。 ;6.2 改进代谢产物的组分; 只产Avermectin “2”组分基因工程菌的构建 ;aveC基因在染色体上的位置;重组质粒的构建; ;重组质粒的转化;Gene replacement (基因置换