遗传育种学第十七章分子育种资料.ppt

第十七章 分子育种;1. 分子育种的概念与程序;1.2 植物基因工程;基因工程的基本概念;1.3 基因工程的基本步骤;1.4 观赏植物基因工程的目的基因;2. 基本技术及原理;DNA重组技术;2.1.1 目的基因的分离（或合成）;2.1.2 基因工程的载体系统;质粒图谱及质粒构建 启动子 外源基因 终止子 启动子 报告基因 终止子 （标记基因） 目的片段 选择标记 载体;植物基因工程的报告基因：;报告基因的种类: ①新霉素磷酸转移酶（ Neomycine phosphotransferase – II, NPT II)基因 ②氯霉素乙酰基转移酶（Chloraphenicol acetyltransferase, CAT）基因 ③潮霉素磷酸转移酶（Hygromycin phosphotransferase, Hpt）基因 ④β – 葡萄糖酸苷酶 （β – Glucuronidase, GUS）基因 ⑤荧光素酶（Luceferase, Luc）基因 ⑥抗除草剂（Basta, Bar）基因;2.2.1 外源DNA导入植物细胞的方法;致癌农杆菌介导的Ti质粒载体转化法;Ti质粒 根瘤农杆菌染色体外的遗传物质，为共价闭合环状的DNA分子。 ;Ti质粒的功能 为农杆菌提供附着于植物细胞壁的能力； 参与寄主细胞合成激素的能力； 诱发植物产生冠瘿瘤； 赋予寄主分解冠瘿碱的能力； 决定寄主范围。;Ti质粒的结构 T-DNA区 Vir 区 Con 区 Ori 区;Vir 区操纵子的基因结构与功能 Vir区是一段长度为35KB操纵子 包含六个基因： VirA、VirB 、 VirC 、 VirD 、 VirE 、 VirG。;植物遗传转化的载体系统;农杆菌介导的转化质粒的构建;农杆菌导入方法;基因枪介导的转基因操作：;操作步骤： 预培养 转基因操作 转基因植株筛选和培养 转基因植株的鉴定 田间释放;影响转化效率的因素： 金属微粒 DNA沉淀辅助剂 DNA纯度和浓度 微弹速度 植物材料;基因枪法的优点： 无宿主限制； 靶受体类型广泛； 可控度高； 操作简便。;;PEG诱导的基因转化;步骤： 共保温； 稀释PEG； 非选择培养； 选择培养。;;脂质体介导：;电激法介导：;2.2.2 转基因操作的受体系统;抗生素敏感实验： 抑制细菌生长 杀死非转化细胞 农杆菌敏感实验：;2.3 转化细胞的培养和转基因植株的再生 ;2.4 转基因植物的鉴定;鉴定步骤： 筛选鉴定（利用质粒上的选择标记） 报告基因鉴定（利用质粒上的报告基因） 遗传鉴定 生长试验;植物遗传转化流程;3. 基因工程的安全性;转基因作物本身成为杂草； 转基因作物使其亲缘野生种成为杂草或超级杂草； 转基因作物可能产生新的病毒或疾病； 转基因作物对非目标生物的危险； 转基因作物作为外来种对新生境的入侵，使生物多样性受到威胁； 转基因作物对生态系统及生态过程的影响： 其它一些不可预计的风险。 ;生物安全的管理：;进入90年代特别是1992年联合国环境与发展大会的召开，更加促进了国际上对生物安全立法工作的重视，特别是大会由许多国家签署的两个纲领性文件《21世纪议程》和《生物多样性公约》均在有关条款中提到了生物技术安全问题。 ;1993年，在原国家科学技术委员会领导下成立了国家生物遗传工程安全委员会，由来自卫生部、农业部、轻工业部的专家组成，负责医药、农业和轻工业部门的生物安全。 目前，在中国负责生物安全的部门有国家环保总局、科技部、农业部、卫生部、国家医药管理局、中国科学院和教育部等。 ;1996年7月10日农业部颁布的《农业生物基因工程安全管??实施办法》是一部较完善、较好的“实施办法”。