酶免疫组化实验资料.pptVIP

酶免疫组化技术;实验目的;免疫组织化学技术（immunohistochemistry technique, IHCT）是指在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，借助可见的标记物，对抗原抗体进行定位、定性和定量检测的一种免疫检测方法。 抗原抗体反应的特异性 组织化学的可见性;分类;酶免疫组化技术;酶免疫组化染色中常用的酶及显示底物;生物素-亲和素放大技术;ABC法原理;优点;实验原理;SABC B-山羊抗鼠IgG抗体 鼠抗CD3单抗 CD3;实验器材与试剂;实验步骤;3、取10ml试管2支，分别加入1.5ml淋巴细胞分离液（Ficoll），将离心管倾斜45?角，在距分层液界面上1cm处将稀释血液沿试管壁缓慢加至分层液上面，每管3ml，注意保持两者界面清晰，勿使血液混入分层液内。;4、2000转/分离心30min，离心后另取1只10ml试管，加入6ml PBS液，用毛细吸管轻轻插到白膜层，取吸淋巴细胞层至此试管中，1500转/分离心10min洗涤2次。 5、第2次洗涤后弃去上清，用移液器将沉淀细胞和试管壁所剩PBS液（约200ul）混匀，吸取20ul细胞悬液于洁净载玻片上，制成涂片，自然干燥。;6、纯丙酮固定20min，双蒸水洗去多余丙酮，自然干燥。 7、在标本处滴加5%BSA封闭液50ul，室温封闭10min，甩去多余液体，不洗。 8、滴加鼠抗人CD3单抗50ul，置湿盒中37℃作用1h。;固定的目的; 9、PBS洗3次，每次2min，用吸水纸将细胞周围擦干。 10、加B-山羊抗小鼠IgG抗体50ul，置湿盒中37℃作用20min。 11、重复9。 12、加SABC 50ul，置湿盒中37℃作用20min。 13、重复9。;14、加DAB 50ul，室温10～13分钟，双蒸水洗。（DAB需现配现用，即将A、B、C液各1滴加入1ml双蒸水中混合） 15、加苏木素染液复染30s。 16、加盖玻片镜检。;五、实验结果判定;;实验讨论