酶法(生科院2015)资料.pptVIP

酶法分析;酶法分析与酶活力测定的异同 ;终点法(总变量法 );终点法的条件;使用终点法应注意的问题;;3．反应液中的酶量;4.反应产物抑制;终点法的种类;尿酸的定量;2.产物增加量的测定 此法可定量的物质有： （1）各种氨基酸和草酸 （2）黄嘌呤、次黄嘌呤以及CoA 3.辅酶变化量的测定 条件：测定以NAD或NADP为辅酶的脱氢酶的底物的量，此法适用范围很广。 原理：NADH和NADPH在340nm有特征最大吸收峰，而NAD和NADP在340nm却无这一吸收带，故可应用于NAD或NADP为辅酶的脱氢酶反应，通过测定340nm吸光度的变化，就可以对作用相应脱氢酶底物的物质进行定量分析。;羟基丙酮酸定量;（二）和指示酶反应偶联的定量法;指示酶反应;A2-A1代表了G-1-P的量;[例2] 样品中同时含有G和果糖，利用酶法分析 测定G的量（利用己糖激酶）;[例3]在一个比色杯中同时定量丙酮酸，磷酸烯醇式丙酮酸和D-2-磷酸甘油酸;;心肌黄酶作为指示剂;酶循环放大分析法;酶循环放大法的原理、步骤 （超微量前列腺素的定量为例）;第三步：指示反应：利用终点法测Glu（或3磷酸甘油酸）的量;在这种方法中应注意的几个问题： 1.在进行循环反应之前，必须设法除去转换反应中剩余的辅酶，在上例中就是设法除去NAD+ 除去的方式：NAD和NADP的氧化型和还原型在不同的pH值下其稳定性不同，可通过调节pH来达到目的 NAD+ NADP+ (氧化型) NADH NADPH(还原型) pH2 （25℃） 1h稳定 5min99.9%被破坏 pH13（60 ℃） 10min99.9%被破坏 1001h 仍稳定 ;单酶循环;（二）应用范围;“酶法分析”一章的要求 1 掌握终点法的测定原理，终点法的条件 2 使用终点法测定时应注意的问题 3 掌握通过测定辅酶变化量的单酶反应定量法（学会如何进行实验设计和分析） 4 掌握以脱氢酶为指示剂的偶联定量法（学会如何进行实验设计和分析） 5 掌握酶循环放大分析的原理和步骤 6 使用循环放大分析法时应注意的问题 7掌握循环放大分析法的应用（学会如何进行实验设计和分析） ;反应速度法;辅酶的测定;抑制剂的测定; 标准曲线;