DNA测序-概述发展史_原理_.ppt

DNA测序-概述发展史，原理，方法，常见问题分析;DNA测序技术-发展历史 ;DNA测序技术-测序原理;化学修饰法测序原理;Sanger法测序的原理;DNA测序技术-方法概述 ;DNA测序技术-常见问题分析; 质粒双克隆 处理办法：双克隆的现象主要发生在质粒测序中，载体序列的峰型比较单一，插入片段开始出现杂峰；PCR测序也可能出现这种情况，主要是因为有两个以上大小相差不多的片段引起的。对于质粒，出现这种情况有两种可能，一是挑克隆时不小心挑了两个以上的克隆，另外一个原因就是有两个片段同时插入同一个载体，对于前一种情况，重新挑克隆即可，后一种情况，一方面可以重新挑克隆，另外也可以将质粒转化后再挑单克隆，可能会改善。对于PCR 产物，由于大小相差不多，无法用Agarose的方式分离，只有进行克隆后测序 ; ; POLY 结构 ;处理办法：我们在测序结果中经常会出现连续的poly G.C.A.T之后有的中断，有的会出现峰型比较杂乱的情况，无可用序列。这种情况下只有从反向进行测序。 ;引物不纯或者发生降解 ;引物与模板有多结合位点 ;重复序列 ;模板不纯 ;碱基发生缺失 ;缺失两个碱基 ;测序发生中断 ;背景较高